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Commençons par une tranche de cerveau de souris immobilisée placée dans une chambre d’enregistrement de l’installation d’électrophysiologie remplie d’un liquide céphalo-rachidien artificiel pour maintenir la viabilité neuronale.
L’installation contient une micropipette d’enregistrement pré-assemblée remplie de solution cationique connectée à un amplificateur et à une unité de contrôle de pression.
À l’aide d’un microscope, localisez un neurone et placez la micropipette près de celui-ci.
Appliquez une pression d’air positive pour éliminer les débris.
Déplacez la micropipette vers le neurone jusqu’à ce qu’une fossette se forme sur la membrane, indiquant la proximité neuronale.
Appliquez une faible aspiration pour tirer un petit patch de membrane à l’intérieur de la micropipette.
Cela crée un joint étanche qui augmente la résistance de la micropipette, confirmant ainsi une étanchéité stable.
Maintenir le potentiel de la cellule à un potentiel de repos physiologique pour la stabilité cellulaire.
Ensuite, appliquez une aspiration brève et forte pour perturber la membrane du patch, établissant ainsi une connexion directe avec l’intérieur de la cellule.
Cette configuration de cellules entières est prête à enregistrer l’activité électrique neuronale.
À l’aide de la molette de mise au point fine du microscope, commencez à faire la mise au point tout en abaissant progressivement la micropipette. Faites toujours la mise au point en premier, puis abaissez la micropipette dans le plan de mise au point pour vous assurer que la pointe de la micropipette ne pénètre pas brusquement dans la tranche. Lorsque la micropipette entre en contact avec la surface de la tranche, ralentissez la vitesse du micromanipulateur en mode moyen-bas. Appliquez doucement une légère pression positive pour éliminer tous les débris sur le chemin.
Ensuite, approchez-vous de la cellule, soit en alternant avec les boutons de commande X, Y, Z, soit en vous approchant en diagonale où les deux axes XZ sont modifiés avec la rotation du bouton de l’axe Z. Lorsque la micropipette est suffisamment proche de la cellule, une fossette apparaît à la surface de la cellule.
Maintenant, appliquez une aspiration faible et brève à travers le tube qui est relié au tube d’aspiration du porte-pipette afin de créer un joint. Pendant la formation d’un gigaseal, utilisez le contrôleur d’amplification contrôlé par ordinateur pour amener le potentiel de rétention des cellules au potentiel de repos physiologique afin d’éviter les changements soudains une fois la membrane rompue. Une fois le gigaseal formé, compensez la capacité rapide ou lente.
Il est très important que l’aspiration appliquée ne soit pas trop forte, sinon la membrane peut se rompre avant d’établir l’étanchéité.
Si le joint reste stable, et au-dessus de 1 giga ohm, appliquez une aspiration brève et forte pour rompre la membrane plasmique.
L’aspiration doit être brève et plus forte que la pression appliquée lors de l’établissement d’un joint afin de rompre correctement la membrane et d’obtenir une configuration stable de cellules entières.