Enregistrements patch-clamp de la dendrite d’un neurone dopaminergique dans une tranche de cerveau

Commencez par une configuration électrophysiologique avec une tranche de cerveau immobilisée immergée dans un liquide céphalo-rachidien artificiel ou un aCSF contenant différents ions.

L’installation comprend une pipette patch remplie d’une solution riche en potassium connectée à une électrode d’enregistrement et à un amplificateur.

Appliquez une pression d’air positive sur la pipette pour éviter son colmatage. Ensuite, positionnez-le près d’une dendrite, l’extension réceptrice du signal d’un neurone dopaminergique.

Le capitonnage membranaire qui en résulte confirme la proximité de la dendrite.

Relâchez la pression positive pour créer une aspiration, formant un joint étanche entre la pipette et la membrane dendritique.

Enregistrez le mouvement ionique initial sous forme de courant d’action à la tension de base.

Injectez un aCSF avec des bloqueurs des canaux sodiques et calciques pour bloquer les canaux respectifs, empêchant ainsi le mouvement des ions à travers eux.

Appliquez une tension négative pour ouvrir un canal cationique voltage-dépendant.

Ce canal permet aux ions potassium de pénétrer dans le neurone, augmentant le courant d’action et suggérant une stimulation de la dendrite dans un neurone dopaminergique.

Dans cette procédure, transférez une tranche de cerveau dans la chambre d’enregistrement. Ancrez la tranche au fond de la chambre d’enregistrement à l’aide d’un anneau en platine et assurez-vous que la tranche est de bonne qualité avec une surface lisse et uniforme. Ensuite, sélectionnez un neurone avec une dendrite s’étendant sur une longue distance dans le même plan, et assurez-vous que la dendrite d’intérêt peut être suivie jusqu’à un soma bien défini. Ensuite, remplissez la pipette patch avec une solution d’électrode.

Pour patcher la dendrite en mode attaché à une cellule, identifiez et concentrez-vous sur une partie de la dendrite. Appliquez une pression positive sur la pipette et abaissez-la à l’aide du micromanipulateur. Ensuite, positionnez la pipette près de la membrane et ajustez la pression afin de créer une petite fossette. Par la suite, relâchez la pression sur la pointe de la pipette et patchez la dendrite tout en contrôlant la résistance de la pipette. Essayez d’obtenir une résistance d’étanchéité supérieure à 1 giga ohm, au mieux entre 3 et 10 giga ohms pour les enregistrements attachés à des cellules.

Ensuite, rétractez la pipette de la membrane de quelques micromètres pour éviter la déformation de la dendrite. Les courants d’action observés ici représentent les potentiels d’action spontanés des neurones nimals. Pour supprimer les courants d’action, appliquez des inhibiteurs des canaux calciques et sodiques sur l’ACSF. Ensuite, appliquez un pas de tension de moins 90 millivolts à partir d’un potentiel de maintien de 0 millivolts pour évoquer le courant cationique activé par l’hyperpolarisation.