Micro-injection de médicament avec enregistrement électrophysiologique dans le cerveau d’un rat

Commencez par un injectrode, un système d’injection contenant des électrodes. Celle-ci comporte une micro-aiguille et une électrode en fil d’argent insérées dans une micropipette en verre.

Remplissez l’injectrode avec une solution de médicament d’essai contenant un colorant pour faciliter le suivi de la propagation du médicament dans le cerveau.

Fixez une seringue remplie d’huile minérale à l’injecteur. Essuyez tout excès de liquide.

Fixez cet injecteur sur une unité stéréotaxique et connectez-le à un système de micropompe.

Positionnez l’injectrode sur la région cérébrale cible d’un rat anesthésié avec un trou chirurgical dans le crâne.

Abaissez progressivement l’injecteur pour pénétrer dans la région cible.

Arrêtez l’insertion à la réception de signaux électriques spécifiques qui confirment le placement optimal de l’injecteur.

Couvrez le crâne exposé avec de la gélose chaude pour éviter le dessèchement des tissus.

Permettez au tissu cérébral de se stabiliser.

Injectez la dose souhaitée du médicament.

Enregistrer des signaux électriques pour surveiller l’activité neuronale en réponse au médicament administré.

Préparez l’injectrode en remplissant d’abord une seringue de 5 à 10 microlitres d’huile minérale. Ensuite, préparez le médicament d’intérêt avec un colorant dans une solution saline physiologique. Ici, 0,5 % de bleu Chicago Sky est mélangé à 300 micromolaires GABA. Maintenant, remplissez la pipette d’injection en chargeant d’abord une seringue de 1 millilitre avec la solution préparée, puis en utilisant la seringue pour charger la pipette.

Lorsque vous retirez la seringue, maintenez une légère pression sur le piston afin qu’un vide n’élimine pas la solution de l’injecteur. Vérifiez qu’il n’y a pas de liquide qui s’échappe aux points de fuite possibles. Tamponnez tout excès de liquide et vérifiez à nouveau s’il n’y a pas de fuite. Fixez maintenant la micro-seringue avec de l’huile minérale à l’injecteur. Ensuite, essuyez tout excès de solution avec de la gaze.

Vérifiez l’embout d’injection. Il doit être possible de faire couler de petites gouttes de solution à travers celui-ci. Dans le cas contraire, il est bloqué ou fuit. Maintenant, montez solidement l’injectrode sur un système de micropompe. Ensuite, déplacez la position de l’injectrode vers les coordonnées de la cible et abaissez l’électrode jusqu’au colliculus supérieur, qui peut être identifié par l’enregistrement des potentiels évoqués visuels.

Pendant que l’électrode est abaissée, appliquez une petite pression positive en appliquant un faible taux d’injection pour éviter le colmatage. Interrompre l’injection lorsque la structure est atteinte. Après avoir inséré l’injectrode, couvrez le cortex exposé avec de la gélose chaude pour éviter la dessiccation. Après la mise en place finale de l’électrode, attendez 30 minutes pour permettre la stabilisation du tissu entourant l’électrode. Ensuite, injecter 400 à 800 nanolitres de solution à raison de 40 nanolitres par minute jusqu’à inactivation de l’activité neuronale dans le colliculus supérieur.

L’électrode doit montrer une réduction des pointes lors de l’injection de la solution inhibitrice.