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Neurosciences
0 vues • 3:37 min • July 8th, 2025
Commencez par une coupe de cerveau cortical préfrontal sécurisée dans un liquide céphalo-rachidien artificiel, ou aCSF, dans la chambre d’enregistrement d’un dispositif d’électrophysiologie.
Ce LCR contient un inhibiteur des canaux ioniques sodiques, qui inhibe les canaux sodiques dans les neurones.
Placez une micropipette remplie d’acide gamma-aminobutyrique, ou GABA, au-dessus d’un neurone postsynaptique.
Placez une micropipette d’enregistrement remplie de solution ionique avec une électrode près du même neurone.
Appliquez une faible aspiration pour créer un joint étanche avec une petite partie de la membrane neuronale.
Ensuite, appliquez une forte aspiration pour perturber la membrane patchée, permettant d’accéder à l’intérieur du neurone.
Libérez le GABA, un neurotransmetteur inhibiteur, qui se lie à un canal chlorure ligand-dépendant sur les neurones postsynaptiques.
Cela ouvre le canal et permet aux ions chlorure de pénétrer dans les neurones, générant un courant postsynaptique inhibiteur.
À tension constante, enregistrez le courant postsynaptique. Une augmentation du courant postsynaptique inhibiteur reflète le rôle du GABA dans l’inhibition de l’activité neuronale.
Transférez une tranche de cerveau dans la chambre d’enregistrement à l’aide d’une pipette Pasteur dont la pointe fine est taillée pour s’adapter à la taille de la tranche. Ensuite, placez une ancre en forme de tranche de platine au-dessus de la tranche pour la maintenir sur la plate-forme. Après cela, remplissez les micropipettes d’enregistrement avec la solution interne et remplissez les micropipettes avec du GABA à 10 micromolaires, 50 micromolaires et 100 micromolaires ou aCSF comme contrôle du véhicule.
Pour éviter le blocage par des débris, appliquez une légère pression positive à l’aide d’une seringue d’un millilitre avant d’immerger l’électrode d’enregistrement dans l’aCSF. Sous un microscope, positionnez l’électrode d’enregistrement et gonflez la micropipette de manière à ce que les pointes apparaissent au centre du moniteur. Ensuite, identifiez un neurone cible. Ajustez la mise au point du microscope tout en abaissant progressivement la micropipette et placez-la au-dessus du neurone enregistreur à un angle de 45 degrés.
Maintenez la distance entre l’extrémité de la micropipette et le neurone cible dans la plage de 20 à 40 micromètres. Lentement et prudemment, approchez-vous du neurone avec l’électrode d’enregistrement, puis relâchez la pression positive. Appliquez une aspiration faible et brève à travers le tube relié au porte-électrode pour créer un joint gigaohm. Maintenez la tension à zéro millivolts.
Après la formation du joint gigaohm, compensez la capacité rapide et lente manuellement ou automatiquement. Ensuite, appliquez une aspiration brève et forte à travers le tube pour passer en mode cellule entière. Par la suite, enregistrez les courants IPSC évoqués en mode pince de tension.
Diffusez des bouffées GABA simples ou appariées à travers la micropipette à bouffées contrôlée par un générateur maître à huit pas de tension. Modifiez la durée de bouffée pour obtenir les meilleurs résultats de courants IPSC évoqués et mesurer les courants IPSC évoqués.