Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:10 min • July 8th, 2025
Commencez par une chambre d’enregistrement du comportement contenant une larve de poisson-zèbre transgénique anesthésiée immobilisée dans une agarose à bas point de fusion.
La région du prétectum du mésencéphale de la larve et le lobe inférieur de l’hypothalamus contiennent des neurones modifiés exprimant des indicateurs de calcium fluorescents.
Retirez l’agarose autour de la tête de la larve et lavez-la à l’eau pour éliminer tout résidu d’agarose.
Placez une paramécie comme proie près de la larve.
Transférez la chambre d’enregistrement sous un microscope à fluorescence.
Lorsque la proie nage, l’œil de la larve la détecte et envoie un signal aux régions du prétectum et de l’hypothalamus impliquées dans la détection des proies.
Cela ouvre des canaux calciques dans ces neurones, permettant aux ions calcium d’entrer et de se lier aux indicateurs calciques, conduisant à l’émission de fluorescence.
Enregistrez l’imagerie en accéléré pour détecter l’intensité de la fluorescence des neurones le long du chemin de nage de la proie et générez une carte couleur.
Sur cette carte, les pointes de flèches représentent les trajectoires des proies : les flèches noires ne montrent aucune excitation neuronale, tandis que les flèches colorées indiquent une excitation neuronale accrue déclenchée par le mouvement de la proie.
Après avoir cultivé une paramécie et anesthésié une larve de poisson-zèbre selon le protocole de texte, placez la larve dans de l’agarose à 2 % à bas point de fusion et retirez immédiatement tout excès d’agarose de sorte que la surface de l’agarose semble légèrement convexe. À l’aide d’une aiguille de dissection, orientez rapidement la larve en position verticale.
Ensuite, à l’aide d’un couteau chirurgical, faites quelques petites entailles dans l’agarose pour enlever l’agarose autour de la tête du poisson-zèbre, ce qui laisse de l’espace pour que la paramécie puisse nager. Retirez soigneusement l’agarose résiduelle en versant doucement l’eau du système sur la chambre. Ensuite, mettez une paramécie dans la chambre d’enregistrement pour servir de stimulus visuel.
Ensuite, placez la chambre d’enregistrement sous un microscope à épifluorescence équipé d’une caméra scientifique CMOS et sélectionnez un objectif 2,5x. Démarrez l’application d’acquisition d’images pour l’appareil photo équipé. Cliquez sur Volet de séquence et sélectionnez Enregistrement de disque dur dans le volet. Dans la section Paramètres de numérisation, définissez le nombre d’images sur 900 ou tout autre nombre total d’images souhaité.
Dans la sous-fenêtre Capture, réglez le temps d’exposition sur 30 millisecondes et le binning sur 2 par 2. Cliquez sur En direct dans le volet de capture pour localiser la larve dans la vue et la mise au point de la caméra, puis cliquez sur Arrêter en direct et cliquez sur le bouton Démarrer. Enregistrez le film au format .cxd et analysez les données selon le protocole texte.