Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Commencez par une chambre d’enregistrement du comportement contenant une larve de poisson-zèbre transgénique anesthésiée immobilisée dans une agarose à bas point de fusion.
La région du prétectum du mésencéphale de la larve et le lobe inférieur de l’hypothalamus contiennent des neurones modifiés exprimant des indicateurs de calcium fluorescents.
Retirez l’agarose autour de la tête de la larve et lavez-la à l’eau pour éliminer tout résidu d’agarose.
Placez une paramécie comme proie près de la larve.
Transférez la chambre d’enregistrement sous un microscope à fluorescence.
Lorsque la proie nage, l’œil de la larve la détecte et envoie un signal aux régions du prétectum et de l’hypothalamus impliquées dans la détection des proies.
Cela ouvre des canaux calciques dans ces neurones, permettant aux ions calcium d’entrer et de se lier aux indicateurs calciques, conduisant à l’émission de fluorescence.
Enregistrez l’imagerie en accéléré pour détecter l’intensité de la fluorescence des neurones le long du chemin de nage de la proie et générez une carte couleur.
Sur cette carte, les pointes de flèches représentent les trajectoires des proies : les flèches noires ne montrent aucune excitation
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