Enregistrement de l’activité neuronale du tissu hippocampique déplié à l’aide d’un réseau de microélectrodes pénétrantes

Prenez une chambre d’enregistrement contenant le réseau de microélectrodes pénétrantes ou PMEA, qui enregistre les signaux électriques du tissu neural.

Connectez l’entrée aux bouteilles contenant de l’aCSF oxygéné et de l’aCSF oxygéné avec de la 4-aminopyridine ou du 4-AP à l’aide d’un connecteur trivalve.

Fixez la sortie à un tube à vide.

Chauffez la canalisation entre l’entrée et le trivalve à la température physiologique.

Avec l’entrée et la sortie fermées, transférez l’hippocampe déplié dans la chambre.

Au microscope, positionnez l’hippocampe sur le PMEA.

Retirez la solution de la chambre.

Placez une ancre à tissu pour maintenir le tissu sur les électrodes PMEA.

Ouvrez l’entrée et la sortie pour démarrer le flux aCSF.

Incuber le tissu avec de l’aCSF pour permettre l’acclimatation neuronale.

Ensuite, écoulez dans un LCR avec 4-AP. Le 4-AP bloque les canaux potassiques neuronaux, prolongeant la durée du potentiel d’action.

Le PMEA capte les signaux électriques proportionnels à l’activation neuronale améliorée des neurones de l’hippocampe.

Dans cette procédure, remplissez une bouteille avec de l’aCSF normal et une autre bouteille avec de l’aCSF 4-AP. Faites buliser les solutions avec 95 % d’oxygène, 5 % de dioxyde de carbone dès le début des expériences. Utilisez un connecteur trivalve pour contrôler la solution qui sera sélectionnée au cours d’une expérience.

Ensuite, connectez un tube à vide à la sortie de la chambre pour retirer la solution dans un bac à poussière. Chauffez le pipeline avant de livrer la solution dans la chambre d’enregistrement et maintenez-le à une température contrôlée de 35 degrés Celsius. Après avoir fermé l’entrée et la sortie de la chambre d’enregistrement, utilisez une pipette en verre compte-gouttes sur mesure pour transférer l’hippocampe déplié dans la chambre d’enregistrement.

Sous le microscope, positionnez l’hippocampe déplié avec son côté visible vers le bas, la zone CA3 pointant vers l’extérieur et le champ CA1 pointant vers le chercheur. Aspirez soigneusement la solution dans la chambre à l’aide d’une pipette à vide depuis le bord de la chambre d’enregistrement jusqu’à ce que la chambre soit sèche et que le tissu repose sur le réseau.

Ensuite, placez soigneusement une ancre de tissu sur mesure sur le tissu pour maintenir l’hippocampe déplié sur le réseau. Remplissez la chambre d’enregistrement avec quelques gouttes de solution. Ouvrez progressivement l’entrée et la sortie pour ajuster le débit à environ deux gouttes par seconde dans la chambre d’égouttement IV.

Incuber le tissu dans la chambre d’enregistrement avec un aCSF normal pendant environ une minute. Ensuite, passez à l’aCSF dissous 4-AP et ajustez correctement le débit. Incuber le tissu dans du 4-AP dissous pendant environ 5 à 10 minutes avant l’enregistrement.