Induire des varicosités axonales avec un stimulus micromécanique sur les neurones

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neurosciences

0 vues • 3:04 min • July 8th, 2025

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Commencez par fixer une micropipette avec le tube attaché à un micromanipulateur.

Fixez l’autre extrémité du tube à une seringue remplie d’un tampon de sel via un connecteur avec une valve tournante.

Réglez la seringue à une hauteur qui fournit une pression suffisante pour induire des varicosités dans les axones.

Les varicosités axonales sont des gonflements en forme de perles qui se produisent sur toute la longueur d’un axone.

Positionnez la micropipette à l’angle souhaité par rapport à la boîte de culture.

Utilisez la lumière fluorescente du microscope pour aligner la pointe de la micropipette et abaissez-la près de la surface de la boîte de culture cellulaire contenant un tampon de sel.

Maintenant, allumez la lumière transmise et désactivez le filtre fluorescent.

Placez une lamelle avec des neurones sur la parabole.

Tout d’abord, concentrez-vous sur la micropipette et ajustez sa position.

Ensuite, concentrez-vous sur la région contenant les neurones cibles.

Ouvrez la vanne pour appliquer la pression du fluide. Ce stimulus micromécanique induit des varicosités dans ces neurones.

Dans cette procédure, insérez la pipette dans le haut de la vis du micromanipulateur pour la maintenir en place. Inclinez la pipette à un angle de 45 degrés avec la surface par rapport à la boîte de culture cellulaire. Activez le filtre de fluorescence. Ouvrez l’ouverture et assurez-vous qu’un point fluorescent peut être vu à travers l’objectif.

À l’aide du micromanipulateur, déplacez la pipette dans une position qui aligne la pointe avec le point fluorescent, et abaissez la pipette dans une position juste au-dessus de la hauteur de la boîte de culture cellulaire. Une fois qu’il est en position, allumez la lumière transmise et désactivez la fluorescence. À l’aide d’une pince à épiler, transférez une lamelle avec les cellules tournées vers la pipette de la plaque de culture cellulaire à la boîte de culture cellulaire contenant 2 millilitres de tampon de Hank à température ambiante.

À l’aide du bouton de mise au point fine et de l’objectif 20 fois, faites la mise au point sur un plan à environ quatre tours complets au-dessus des cellules. Ensuite, à l’aide du micromanipulateur, positionnez la pointe de la pipette de manière à ce qu’elle soit focalisée et au centre du côté gauche du plan, comme on le voit à travers les oculaires. Une fois la pipette en place, focalisez le microscope sur un plan qui contient la région d’intérêt.

Dans l’imagerie de 7DIV, les neurones de l’hippocampe de souris transfectés par GFP ont montré un axone avant et après l’inhalation.

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Dernière mise à jour : 22 août 2026