Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:42 min • July 8th, 2025
Prenez une pipette d’enregistrement avec un fil-électrode dans une solution d’électrolyte.
Positionnez la pipette au-dessus d’une tranche de cerveau immobilisée.
Ajustez le courant de la pipette pour réduire les signaux de fond.
À l’aide d’un microscope, localisez le neurone cible et déplacez la pipette vers le neurone.
Appliquez une légère pression positive et verrouillez-le.
La pression positive perturbe la surface du tissu, indiquant la proximité de la cellule.
Rapprochez la pipette jusqu’à ce qu’une fossette se forme sur la membrane, ce qui signifie un positionnement correct.
Relâchez la pression positive.
Observez une augmentation de la résistance lorsque la cellule forme un joint avec la pipette.
Maintenez le potentiel de membrane à une tension négative constante pour plus de stabilité.
Retirez la micropipette pour éliminer l’excès de pression.
Ajustez les réponses électriques rapides et lentes de la pipette pour plus de précision.
Appliquez une brève aspiration pour percer la cellule, en établissant une connexion électrique directe.
La configuration de la pince de tension de la cellule entière est maintenant prête pour l’enregistrement électrophysiologique.
Pour obtenir une configuration de cellule entière, placez la pipette d’enregistrement juste au-dessus de la tranche et décalez le courant de la pipette en mode Pince de tension. Appliquez une légère pression positive sur la pipette et verrouillez le robinet d’arrêt.
Ensuite, sélectionnez une cellule saine avec une membrane intacte et approchez-vous du tissu avec la pipette. La pression positive doit provoquer une légère perturbation sur les tissus. Rapprochez lentement la pipette de la cellule dans un mouvement diagonal jusqu’à ce qu’une petite fossette se forme à la surface de la cellule. Ensuite, relâchez le verrou de pression positive. La cellule commencera à former un joint et la résistance augmentera au-dessus d’un gigaohm. Dans la pince de tension, maintenez la cellule à -68 millivolts.
Ensuite, tirez légèrement la pipette en diagonale pour éliminer l’excès de pression. Compensez la capacité rapide et lente de la pipette. Appliquez une brève aspiration à travers le tube relié au porte-pipette pour percer la cellule et obtenir une configuration de cellule entière.