Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:00 min • July 8th, 2025
Montez une mouche drosophile sur un support avec la tête exposée.
Créez une ouverture dans un œil et retirez la cornée pour exposer la rétine.
Placez le support sur la plate-forme d’enregistrement.
Insérez une électrode de référence émoussée contenant une solution saline physiologique dans la capsule céphalique.
Ensuite, insérez une électrode d’enregistrement tranchante contenant une solution imitant l’environnement intracellulaire à travers l’ouverture de la rétine.
Laissez l’œil s’adapter à l’obscurité.
Mesurez la résistance de l’électrode d’enregistrement pour vous assurer qu’elle convient à l’enregistrement.
Ensuite, éliminez la différence de tension de base entre les électrodes d’enregistrement et de référence.
Pendant l’adaptation à l’obscurité, des canaux ioniques spécifiques dans les cellules photoréceptrices de la rétine restent ouverts, permettant un afflux constant d’ions positifs.
Stimulez l’œil avec des flashs lumineux.
En réponse, les canaux ioniques se ferment, réduisant l’afflux d’ions positifs et favorisant l’efflux.
Par conséquent, le potentiel membranaire des photorécepteurs devient plus négatif, mesuré par l’électrode enregistreuse comme une baisse de la tension.
Lors de l’utilisation de l’amplificateur à microélectrodes, soyez toujours mis à la terre en touchant la surface métallique de la cage de Faraday ou de la table anti-vibration pour éviter les charges statiques. Fixez le double-toit monté au poteau de la plate-forme de préparation des mouches.
Faites pivoter le porte-mouche de sorte que l’œil gauche de la mouche soit directement face à l’enquêteur. Ensuite, à l’aide d’un petit micromanipulateur grossier, insérez doucement l’électrode de référence émoussée à travers les ocelles de la mouche dans la capsule céphalique. Assurez-vous que la mouche semble toujours en bonne santé et bouge ses antennes. La préparation doit être superbe pour mériter l’enregistrement.
Maintenant, enfoncez la microélectrode d’enregistrement tranchante dans l’œil gauche à travers l’ouverture recouverte de gelée. Lorsqu’elle pénètre dans le tissu, l’emplacement de l’extrémité de l’électrode doit être apparent par son motif de réflectance. La pointe fragile de l’électrode doit être parfaitement guidée ou elle se cassera, ce qui est très difficile.
Selon le type de cellule à partir de laquelle l’enregistrement est effectué, la tête de la mouche doit être orientée légèrement différemment. Une fois les électrodes en place, allumez l’amplificateur de microélectrodes. Ensuite, éteignez la source de lumière froide, débranchez-la du secteur et connectez-la à la terre centrale pour minimiser le bruit électrique induit par la boucle de terre.
Ensuite, ajustez les guides de lumière en col de cygne de manière à ce que le système de bras à cardan puisse être déplacé librement autour de la mouche. Ensuite, éteignez les lumières de la pièce pour mettre la préparation des mouches dans une obscurité relative. Maintenant, mesurez la résistance de l’électrode d’enregistrement dans l’œil. Il doit être compris entre 100 et 250 mégaohms.
Ensuite, réglez l’amplificateur sur la pince de courant ou le pont, et mettez à zéro la tension entre les électrodes. Une fois que la mouche s’est adaptée à l’obscurité pendant quelques minutes, enfoncez la pointe de l’électrode d’enregistrement dans l’œil par pas de 0,1 à 1 micron à l’aide d’un pas piézoélectrique ou en utilisant une rotation douce du bouton de résolution fine.
À chaque étape, stimulez l’œil avec un flash lumineux de 1 à 10 millisecondes. Chaque flash lumineux provoquera une brève baisse de la tension ou de l’ERG.