Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:42 min • July 8th, 2025
Commençons par un rat anesthésié fixé dans un cadre stéréotaxique avec son crâne exposé.
Utilisez des points de référence sur le crâne pour calibrer et marquer les coordonnées souhaitées.
Percez des trous aux endroits marqués.
Enlevez les débris et ouvrez la couche externe du cerveau.
Rincez fréquemment les trous avec une solution saline pour éviter le dessèchement.
Percez des trous supplémentaires et des vis d’ancrage pour soutenir les électrodes.
Installez les électrodes de référence et les électrodes d’enregistrement électrophysiologiques. Fixez-les en appliquant de la résine acrylique.
Disposez les électrodes à microfils de tungstène sur un cadre en fonction des emplacements multicibles dans le cerveau.
Plusieurs électrodes permettent d’enregistrer simultanément les activités cérébrales à partir de plusieurs sites cibles.
À l’aide du point de référence sur le crâne, positionnez les électrodes en microfils de tungstène.
Insérez-les doucement dans le cerveau.
Configurez le logiciel d’enregistrement pour détecter l’activité cérébrale.
Abaissez les électrodes à la profondeur cible et commencez l’enregistrement des données.
Au microscope, utilisez un outil d’alignement stéréotaxique standard pour calibrer l’extrémité désignée sur le bregma et ajustez la barre d’incisive jusqu’à ce que les points désignés pour le bregma et le lambda sur l’outil touchent le crâne en même temps. À l’aide d’un support stéréotaxique avec canule, calibrez-le au bregma, puis calculez la position de tous les trous de forage sur le crâne.
Ensuite, marquez les positions des trous à percer soit en grattant soigneusement le crâne, soit à l’aide d’un marqueur de couleur chirurgical. Ensuite, à l’aide d’une micro-perceuse, percez soigneusement tous les trous d’un diamètre d’environ 1 millimètre. Pour le STN et le SNr, percez un trou commun d’environ 2 millimètres sur 3 millimètres.
Prenez une fine canule et pliez la pointe pour former deux crochets. Ensuite, utilisez les crochets pour enlever tous les débris des trous de forage et coupez et retirez soigneusement la dure-mère dans le trou STN/SNr commun. Après cela, rincez les trous de forage avec une solution saline physiologique.
Appliquez une goutte de sérum physiologique toutes les 15 minutes sur les trous de forage pour éviter que le cerveau et la dure-mère ne se dessèchent. Prenez ensuite une micro-perceuse et une micro-vis en acier inoxydable assortie. Percez un trou et vissez une micro-vis entre les trous de perçage des électrodes péridurales de référence au-dessus du cervelet.
Ensuite, guidez les pointes des électrodes à l’aide d’une pince à épiler fine et faites-les glisser directement sous l’os du crâne dans les trous de forage. Fixez toutes les électrodes péridurales avec de l’acrylique dentaire à deux composants. Assurez-vous de ne pas couvrir le point de bregma ni d’affecter le trou STN/SNr commun.
Ensuite, insérez le support préparé avec les électrodes en microfil de tungstène dans le cadre stéréotaxique. Calibrez l’électrode la plus ventrale sur le bregma, qui est destiné à cibler le STN. Ajustez-vous à la position calculée au-dessus du trou STN/SNr commun et abaissez les électrodes jusqu’au cerveau.
Assurez-vous que les électrodes des microfils de tungstène pénètrent doucement dans le cerveau. Dans cette procédure, configurez le logiciel d’enregistrement tel que le filtre passe-bande et amplifiez le signal de données brutes. Ensuite, utilisez un filtre LFP et spike en ligne avec les paramètres appropriés.
Pour tous les filtres, utilisez un filtre de type Butterworth. Configurez un seuil de pics pour le tri des pics en ligne. La plupart des logiciels d’enregistrement permettent de configurer un seuil de pointe, qui est une valeur d’amplitude au-dessus du seuil à laquelle un signal est marqué comme un pic par le logiciel. Ensuite, abaissez lentement les électrodes des microfils de tungstène à 1 millimètre au-dessus du STN et attendez que le signal se stabilise si nécessaire.