Enregistrement de l’activité neuronale chez des souris se déplaçant librement à l’aide de la photométrie à fibre

Commencez avec une souris se déplaçant librement avec une canule à fibre optique implantée.

Connectez une extrémité d’un cordon de raccordement à fibre optique à la canule et l’autre extrémité à une source de lumière d’excitation.

La souris exprime un indicateur de calcium génétiquement codé (GECI) dans la zone hypothalamique latérale, ou neurones LHA.

La fibre optique implantée entre en contact avec la région latérale de l’habenula, ou LHb, où se terminent les axones du LHA.

Excitez le GECI à sa longueur d’onde d’excitation optimale et enregistrez le signal de base.

Maintenant, appliquez des bouffées d’air répétées sur la souris pour susciter une réponse de stress aversive.

Ce stimulus déclenche des potentiels d’action dans les terminaisons axonales du LHA, ouvrant des canaux calciques voltage-dépendants et permettant l’afflux de calcium.

Les ions calcium intracellulaires se lient au GECI, induisant un changement de conformation qui augmente l’émission de fluorescence verte.

Visualisez le signal optique.

L’augmentation de la fluorescence en réponse aux bouffées d’air chez la souris confirme le rôle de la voie LHA-LHb dans la transmission de signaux aversifs.

Commencez par inspecter l’extrémité distale des fibres du cordon de raccordement à l’œil nu et à l’aide d’un mini microscope à fibres. Si la surface des fibres est rayée, repolissez les fibres à l’aide d’un film de polissage des fibres à grain fin. Ensuite, nettoyez les extrémités distales du cordon de raccordement avec de l’éthanol à 70 % et un applicateur à coton-tige. Nettoyez les canules à fibre optique à l’aide d’éthanol à 70 % et d’un applicateur à coton-tige.

Connectez l’extrémité de la virole du cordon de brassage à la fibre implantée à l’aide d’un manchon fendu en céramique recouvert d’un tube rétractable noir. Lors de la connexion, assurez-vous que le manchon est bien serré. Laissez l’animal récupérer pendant quelques minutes, puis commencez à enregistrer le signal optique et exécutez l’expérience. Pendant l’enregistrement, gardez un œil attentif sur la trace en direct pour garantir des enregistrements de qualité, et surveillez tout saut de signal indiquant que le manchon n’est pas assez serré.