Enregistrements électrophysiologiques de neurones reprogrammés dans une tranche de cerveau de souris

Prenez une tranche coronale de souris génétiquement modifiée immobilisée dans une chambre d’enregistrement perfusée avec un tampon oxygéné.

La tranche contient la région striatale, qui a des interneurones reprogrammés à partir de cellules précurseurs d’oligodendrocytes marquées par un marqueur interneuronal et l’expression de la protéine fluorescente.

Assemblez une pipette d’enregistrement composée d’une électrode immergée dans une solution intracellulaire.

Identifier au microscope un interneurone fluorescent.

Maintenez une pression positive dans la pipette et avancez-la vers l’interneurone cible, en contactant la membrane.

Appliquez une pression négative pour former un joint à haute résistance.

Appliquez des impulsions de pression négative pour briser la membrane, établissant ainsi une configuration de cellules entières.

Maintenir le potentiel membranaire de l’interneurone à une valeur négative constante.

Appliquez de brefs courants incrémentiels, en ouvrant les canaux ioniques et en modifiant le potentiel de membrane, déclenchant ainsi un potentiel d’action.

Finalement, la membrane revient au potentiel de repos.

Observez ces changements de potentiel membranaire en réponse à l’injection actuelle, indiquant une maturation neuronale et une reprogrammation réussie.

Après avoir transféré une section de tissu dans une chambre d’enregistrement pour l’électrophysiologie, montez la pipette en verre sur l’électrode d’enregistrement et abaissez-la dans la solution. Vérifiez la résistance de l’électrode. Ensuite, approchez-vous lentement de la cellule reprogrammée avec la pipette, en maintenant une légère pression positive dans l’électrode pour éviter de boucher la pointe, et vérifiez que la cellule est GFP positive avant de patcher.

Lorsque la cellule est réparée, maintenez la cellule en pince de courant de moins 60 à moins 70 millivolts, et injectez des courants de 500 millisecondes de moins 20 à plus 90 picoampères avec des incréments de 10 picoampères pour induire des potentiels d’action. Ceci est révélateur d’une maturation neuronale et d’une reprogrammation réussie.