Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Prenez le contrôle et les larves transgéniques de la mouche des fruits Drosophila.
Les larves transgéniques expriment un canal ionique sensible à la lumière dans les neurones récepteurs olfactifs ou ORN. Ces neurones font partie du circuit olfactif, qui détecte les stimuli olfactifs et transmet des signaux au cerveau, guidant le mouvement larvaire en réponse aux stimuli.
Placez les larves sur un plat avec de l’agarose solidifié à l’intérieur d’une arène de comportement et couvrez le plat.
Exposez les larves à une longueur d’onde de lumière qui stimule les canaux ioniques et enregistrez le comportement de navigation des larves.
La lumière active le tout-trans-rétinien, un chromophore, qui induit l’ouverture des canaux ioniques, connue sous le nom de stimulation optogénétique, et permet l’afflux de cations.
L’afflux génère des potentiels d’action qui transmettent des signaux le long du circuit olfactif, ce qui a un impact sur le comportement de navigation des larves.
Les larves transgéniques avec des canaux ioniques sensibles à la lumière présentent un changement dans la distance parcourue en ligne droite avant de changer de direction, connu sous le nom de longueur de course, par rapport aux larves témoins.
Pour le test de comportement, maintenez une température et une humidité constantes dans la salle de comportement. Préparez un milieu de culture larvaire en versant 150 millilitres d’agarose fondu à 1,5 % dans une boîte de Pétri de 22 centimètres sur 22 centimètres carrés.
Laissez l’agarose se solidifier et refroidir pendant 1 à 2 heures dans les boîtes de Pétri, avant de les utiliser dans le test de comportement. Une fois que l’agarose s’est solidifiée, ne transférez pas plus de 20 larves du troisième stade préparées au centre de la boîte de Pétri et couvrez la boîte de Pétri avec son couvercle.
Placez la boîte de Pétri dans l’arène de comportement sous la caméra CCD. Allumez la source de lumière LED infrarouge de 850 nanomètres pour visualiser les larves dans la vidéo. Démarrez la caméra CCD pour enregistrer le mouvement des larves. Enfin, passez au traitement et à l’analyse des données.