JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 3:11 min • July 8th, 2025
Placez une boîte de Pétri contenant une larve de drosophile disséquée avec les muscles et les branches nerveuses exposés sur la platine du microscope.
Insérez une électrode de référence dans une solution de bain à l’intérieur de la boîte de Pétri.
Remplissez une électrode d’enregistrement avec une solution isotonique.
À l’aide d’un micromanipulateur, positionnez cette électrode sur un muscle abdominal innervé par des motoneurones.
Placez l’extrémité de l’électrode sur un bouton synaptique, une structure à l’extrémité de l’axone contenant des neurotransmetteurs.
Enregistrez en continu les courants jonctionnels excitateurs miniatures ou mEJCs, qui sont des réponses à la libération spontanée de neurotransmetteurs.
La plage correcte d’amplitude mEJC confirme le bon positionnement de l’électrode.
Ensuite, placez une électrode de stimulation près de l’axone qui innerve le muscle ciblé.
Appliquez une pression négative pour tirer l’axone à l’intérieur de l’électrode.
Augmentez progressivement le courant de stimulation pour induire un potentiel d’action.
Cela déclenche la libération par l’axone de neurotransmetteurs à la jonction neuromusculaire, qui sont enregistrés sous forme de courants synaptiques.
Placez la boîte de Pétri avec la préparation sur la platine du microscope. Insérez l’électrode de référence dans le bain. Remplissez l’électrode d’enregistrement avec la solution HL3. Sous l’objectif 10x, plongez l’électrode dans le bain et placez-la sur les muscles six et sept des segments abdominaux 2, 3 ou 4 à l’aide du micro-manipulateur.
Ensuite, passez l’objectif à 60X et concentrez-vous sur la zone d’intérêt à l’aide d’une optique d’épi-fluorescence ou DIC. Placez la pointe de l’électrode sur les boutons synaptiques, puis appuyez très doucement l’électrode sur le muscle car une pression excessive peut endommager la JNM ou induire une augmentation de l’activité synaptique spontanée.
Ensuite, allumez l’amplificateur, la carte AD et l’ordinateur. Ensuite, choisissez le mode de pince de tension sur l’amplificateur. Démarrez le logiciel d’acquisition, choisissez le mode Sans espace et observez l’apparition des mEJCs sur l’écran de l’ordinateur. Assurez-vous que l’amplitude des mEJC est comprise entre 0,2 et 0,7 nanoampères.
À l’aide d’un micro-manipulateur sous contrôle visuel, placez l’électrode de stimulation près de l’axone en innervant les segments abdominaux 2 à 4. Appliquez une pression négative en tirant sur le piston de la seringue reliée au porte-électrode, de sorte que l’axone soit tiré à l’intérieur de l’électrode.
Ensuite, allumez le stimulateur. Tournez le bouton de l’unité d’isolation pour régler un courant nul, puis augmentez-le doucement jusqu’à ce que les EJC apparaissent, ou jusqu’à ce que le seuil soit atteint. Effectuez la stimulation dans un régime supraseuil, avec le courant de stimulation augmenté environ deux fois par rapport au seuil d’observation des ECJ.