Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:20 min • July 8th, 2025
Commencez par une configuration électrophysiologique contenant un segment de côlon de souris immobilisé dans une solution électrolytique équilibrée.
Le côlon a un ganglion pelvien majeur exposé avec une branche nerveuse sensorielle afférente du côlon pré-disséquée qui transmet des signaux du côlon au cerveau.
Le côlon est canulé aux deux extrémités avec des valves à trois voies pour la perfusion saline.
Remplissez l’électrode d’enregistrement et positionnez-la près du nerf afférent.
Appliquez une légère aspiration pour tirer le nerf dans l’électrode, formant un joint étanche.
Surveillez le signal électrique nerveux de base et la pression interne du côlon.
Fermez le robinet sur la canule de sortie tout en infusant continuellement la solution saline dans le côlon.
Cela provoque une augmentation progressive de la pression à l’intérieur du côlon, entraînant une distension du côlon et stimulant le nerf afférent.
Réenregistrez le signal nerveux et la pression du côlon.
Une augmentation progressive du signal nerveux avec une pression accrue confirme la stimulation du nerf afférent.
Inspectez une pipette en verre pré-tirée sous le microscope de dissection. Cassez l’extrémité de l’électrode à l’aide d’une pince, de manière à ce qu’elle soit d’une taille compatible avec le diamètre du nerf à enregistrer. Ensuite, biseautez la pointe en la plaçant près d’un évasement plus léger.
Les personnes qui ne connaissent pas cette méthodologie peuvent également trouver difficile de biseauter l’extrémité de l’électrode en fonction de la taille du nerf.
Ensuite, placez l’électrode biseautée dans le porte-électrode. Ensuite, connectez une seringue de 10 millilitres à l’orifice latéral du support pour l’application d’une pression négative ou positive sur l’électrode. Après cela, connectez le support à l’étage de tête du bioamplificateur et montez l’étage de tête sur un manipulateur.
Ensuite, déplacez l’électrode dans le bain de tissu et remplissez l’électrode avec la solution de Krebs en appliquant une légère aspiration, jusqu’à ce qu’elle entre en contact avec le fil d’argent du support. Ensuite, placez l’extrémité de l’électrode près de l’extrémité coupée du nerf et appliquez une pression négative pour aspirer le nerf dans l’électrode. Ensuite, appliquez plus de pression négative de sorte qu’environ 1 millimètre du nerf soit tiré dans l’électrode et forme un joint étanche.
Maintenant, allumez le bioamplificateur et réglez le filtre sur 300 à 3 000 hertz. Surveillez le signal sur l’oscilloscope et enregistrez le signal nerveux et le signal de pression intraluminale dans le logiciel de traitement Spike Data. Ensuite, appliquez une distension de rampe du côlon en fermant le robinet à trois voies sur la canule de sortie tout en perfusant continuellement intraluminiquement. Surveillez la pression intraluminale jusqu’à ce qu’elle atteigne 60 millimètres de mercure.