Évaluation de la fonction mitochondriale dans les cellules endothéliales vasculaires cérébrales

Commencer avec des cellules endothéliales vasculaires cérébrales ou CVE dans des milieux de culture.

Les cellules CVE sont des cellules à haute consommation d’énergie qui tapissent les vaisseaux sanguins du cerveau et sont essentielles à la physiologie du cerveau.

Placez les cellules dans une plaque de culture cellulaire à flux extracellulaire. Incuber pour l’attachement cellulaire.

Remplacer le milieu de culture par un milieu d’essai de flux extracellulaire ayant le pH souhaité.

Incuber sans dioxyde de carbone pour maintenir le pH.

Ensuite, prenez une cartouche de capteur de flux extracellulaire, qui comprend des capteurs et une plaque inférieure.

Ajoutez une solution d’étalonnage à la plaque et incubez sans dioxyde de carbone pour hydrater les capteurs.

Ces capteurs peuvent mesurer les changements de concentration d’oxygène dans l’environnement extracellulaire, indiquant l’activité mitochondriale.

Ensuite, chargez la cartouche dans un bioanalyseur et calibrez les capteurs.

Remplacez la plaque inférieure par la plaque contenant les cellules.

Mesurer la fonction mitochondriale des cellules CVE.

Après le nombre approprié de sous-cultures, ensemencez 1,6 x 10⁴ cellules dans 80 microlitres de milieu complet par puits sur une plaque de culture cellulaire à flux extracellulaire de 96 puits et placez la plaque dans un incubateur à 37 degrés Celsius avec 5 % de dioxyde de carbone.

La veille de l’essai d’évaluation fonctionnelle mitochondriale, hydratez une cartouche de capteur de flux extracellulaire avec 150 microlitres de solution de calibrant de flux extracellulaire et incubez la plaque pendant la nuit à 37 degrés Celsius sans dioxyde de carbone.

Le lendemain matin, utilisez la station de lavage de plaques pour transformer le milieu de culture cellulaire en milieu d’essai de flux extracellulaire pH 7,0, puis incubez les cellules à 37 degrés Celsius sans dioxyde de carbone pendant 30 à 60 minutes. Lorsque les cellules se sont équilibrées, chargez la cartouche hydratée dans le bioanalyseur et cliquez sur le bouton Démarrer pour commencer l’étalonnage.

À la fin de l’étalonnage, cliquez sur l’invite Déverrouiller la cartouche pour retirer la plaque inférieure de la cartouche et chargez la plaque de la cellule, puis ouvrez le fichier de données pour obtenir les valeurs de vitesse du bioanalyseur à exporter dans le fichier de tableur.