Enregistrement de l’activité du nerf afférent mésentérique dans un segment de jéjunum de souris ex vivo

Commencez par une chambre d’enregistrement contenant un segment disséqué d’un jéjunum de souris, une partie de l’intestin grêle, immergée dans une solution électrolytique et fixée à l’aide d’une goupille.

Le segment jéjunal comprend le tissu adipeux environnant avec un nerf afférent mésentérique pré-disséqué, qui transmet des signaux du jéjunum au cerveau.

Le segment est connecté aux orifices d’entrée et de sortie de la chambre pour l’écoulement de la solution.

Prenez une électrode d’aspiration reliée à un micromanipulateur et à une unité d’enregistrement.

Remplissez l’électrode d’aspiration avec la solution électrolytique et positionnez-la près du nerf afférent mésentérique.

Appliquez une légère succion pour tirer le nerf avec le tissu adipeux environnant afin de former un joint étanche.

Fermez l’orifice de sortie tout en maintenant l’entrée pour augmenter progressivement la pression interne et la distension du segment jéjunal.

Cela provoque l’excitation du nerf afférent mésentérique autour du jéjunum, générant un signal électrique.

Enregistrez l’activité du nerf afférent en réponse aux changements de pression jéjunale.

Dans cette procédure, à l’aide d’un micromanipulateur, abaissez l’extrémité de l’électrode d’aspiration dans le bain d’organe. Ensuite, aspirez doucement un peu de solution de Krebs du bain d’organe de sorte que l’extrémité de l’électrode soit immergée dans la solution de Krebs. Assurez-vous que la solution Krebs couvre le fil-électrode à l’intérieur de l’électrode d’aspiration.

Ensuite, positionnez l’extrémité de l’électrode d’aspiration immédiatement à côté du brin de nerf afférent transecté et tirez le brin de nerf transecté dans le capillaire sur toute sa longueur. Manœuvrez l’extrémité de l’électrode vers le tissu adipeux et aspirez-la dans le capillaire en verre avec le piston, scellant ainsi mécaniquement le nerf du capillaire du contenu du bain d’organe.

Pour vérifier l’enregistrement de l’activité nerveuse afférente, effectuez une augmentation induite par la distension de rampe de la décharge afférente en fermant l’orifice de sortie pour entraîner une augmentation progressive de la pression dans le segment intestinal. N’exécutez le protocole expérimental souhaité que lorsque trois distensions de rampe consécutives produisent une décharge multi-unités reproductible.