Implantation d’un ensemble d’électrodes dans un cerveau de souris pour l’enregistrement électrophysiologique

Fixez une souris anesthésiée sur un cadre stéréotaxique contenant un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle.

Appliquez un lubrifiant pour éviter que les yeux ne se dessèchent et injectez une solution électrolytique par voie sous-cutanée pour maintenir l’hydratation.

Retirez la fourrure du cuir chevelu, désinfectez la zone et injectez un analgésique par voie sous-cutanée pour réduire la douleur.

Faites une incision pour exposer le crâne, puis nettoyez-le pour rendre visibles les repères anatomiques permettant d’identifier les régions du cerveau.

Appliquez de l’adhésif dentaire et durcissez-le à l’aide d’une lampe à polymériser pour faciliter l’implantation des électrodes.

Percez des trous au-dessus de l’hippocampe et du cervelet, et montez un ensemble d’électrodes à l’aide d’un support sur le cadre stéréotaxique.

Les électrodes bipolaires enregistrent l’activité de l’hippocampe, tandis qu’une électrode de référence obtient l’activité de base du cervelet.

Insérez les électrodes, fixez l’ensemble avec du ciment dentaire et détachez-le du support.

Administrez à nouveau la solution électrolytique et un analgésique.

Laissez la souris récupérer complètement avant d’effectuer un enregistrement électrophysiologique.

Avant de procéder à l’opération, notez le poids des souris VGAT-Cre âgées de 8 semaines. Ensuite, placez l’animal dans une chambre d’induction pour induire une anesthésie. Placez la souris anesthésiée sur un coussin chauffant à 37 degrés Celsius. Si vous utilisez un système de température contrôlé par rétroaction, insérez la sonde de température dans le rectum de l’animal pour surveiller la température pendant la chirurgie. Pour commencer la chirurgie, redirigez le flux d’anesthésie inhalée vers le cône nasal et montez l’animal dans le cadre stéréotaxique en plaçant doucement les dents supérieures avant dans la barre incisive et déplacez le cône sur son nez, puis placez les barres d’oreille dans les oreilles et fixez-les au cadre stéréotaxique.

Assurez-vous que la tête de l’animal est nivelée et centrée et qu’elle ne peut pas être déplacée lorsqu’elle est légèrement sondée. Une fois l’animal monté, injectez 0,5 millilitre de normosol sur les souris pour les hydrater et appliquez un lubrifiant oculaire pour éviter le dessèchement de la cornée. Surveillez la profondeur de l’anesthésie en pinçant un orteil du membre arrière. Si le réflexe de retrait est absent chez l’animal, procédez à l’ablation des poils du cuir chevelu de la souris autour de la zone chirurgicale. Une fois terminé, désinfectez la zone de la peau propre trois fois avec une application alternée d’éthanol et d’iode en terminant par de l’iode, et injectez 0,05 millilitre de bupivacaïne à 0,25 % par voie sous-cutanée.

Faites une incision sur le crâne à l’aide d’un scalpel, puis découpez une partie de la peau avec des ciseaux chirurgicaux exposant le crâne. Poussez la peau de côté avant de nettoyer le crâne de tous les tissus sous-jacents avec un coton-tige. Nettoyez le crâne avec du peroxyde d’hydrogène à l’aide de cotons-tiges stériles et rendez visibles les sutures du crâne, le bregma et le lambda. À l’aide de la perceuse montée en stéréotaxie, déplacez la pointe de la perceuse sur bregma et zéro les coordonnées x, y et z, puis soulevez et déplacez la perceuse sur lambda pour déterminer ses coordonnées afin de déterminer si la tête est de niveau.

Après avoir soigneusement séché le crâne, appliquez une goutte d’adhésif dentaire automordançant avec l’applicateur. Attendez 60 secondes avant de durcir l’adhésif dentaire avec une lumière UV dentaire pendant 40 secondes. Une surface brillante indique que l’adhésif a été efficacement réticulé avec le crâne. À l’aide d’un foret de 0,031 pouce, percez soigneusement deux trous de forage bilatéraux dans le crâne à 5 000 rotations par minute, ou RPM, en évitant de percer dans le cerveau. Appliquez une goutte de solution saline pour améliorer le perçage des trous de bavures. Pour l’implantation d’électrodes de profondeur de l’hippocampe, percez à 3 millimètres en arrière et à 3 millimètres latéralement du bregma.

Percez un trou de bavure pour l’électrode de référence au-dessus du cervelet, derrière le lambda à 6 millimètres en arrière et à 0 millimètre latéralement du bregma. Ensuite, montez le socle à six broches avec les électrodes assemblées dans le porte-électrode sur un cadre stéréotaxique. En alignant les électrodes au-dessus des trous de bavure correspondants, abaissez lentement et naviguez dans le casque pour localiser les deux pointes d’électrode bipolaires juste au-dessus des trous de bavure de l’hippocampe gauche et droit, et si nécessaire, ajustez l’électrode de référence pour qu’elle plane au-dessus du trou, au-dessus du cervelet.

Lorsque les électrodes de torsion de l’hippocampe sont juste au-dessus des trous, mettez à zéro l’axe z et abaissez lentement l’électrode à moins trois millimètres dans l’hippocampe droit et gauche, et guidez l’électrode de référence dans le trou au-dessus du cervelet. Préparez le ciment dentaire en mélangeant la poudre et le liquide dans un bol à mélanger, puis couvrez la surface du crâne, les électrodes et l’espace entre la surface du crâne et le bas du socle avec du ciment dentaire.

Une fois que le ciment a sec et durci, détachez le porte-électrode du bras stéréotaxique, levez le bras et retirez le support du socle. Après avoir administré à la souris par voie sous-cutanée du kétoprofène et du normosol, retirez l’animal du cadre stéréotaxique pour le déplacer sur le coussin chauffant de la cage du vivarium. Une fois complètement réveillé, retournez l’animal dans la cage du vivarium, nourrissez-le avec de la nourriture molle et surveillez la perte de poids quotidiennement jusqu’à 72 heures après la chirurgie.