Imagerie de la signalisation calcique induite par la nicotine le long des axones ventraux de l’hippocampe dans des co-cultures synaptiques

Prenez des co-cultures génétiquement modifiées de tranches d’hippocampe ventral de souris et de neurones du noyau accumbens sur une lamelle.

Les neurones de l’hippocampe projettent des terminaisons axonales pré-synaptiques surexprimant les récepteurs nicotiniques de l’acétylcholine, formant des synapses avec les neurones du noyau accumbens post-synaptiques.

Les neurones sont chargés d’un colorant indicateur de calcium pour les mesures de calcium intracellulaire.

Transférez la lamelle dans une chambre de microscope confocal imprégnée d’un tampon contenant des ions calcium.

Capturez des images fluorescentes des projections axonales de l’hippocampe comme contrôle.

Perfuser la nicotine, qui se lie aux récepteurs nicotiniques de l’acétylcholine sur les neurones de l’hippocampe, déclenchant un afflux de calcium.

Les ions calcium se lient au colorant intracellulaire, augmentant la fluorescence.

Les axones de l’hippocampe libèrent des neurotransmetteurs excitateurs, initiant la transmission synaptique dans les neurones du noyau accumbens.

Laver avec un tampon pour éliminer la nicotine.

Au fil du temps, l’activation du récepteur nicotinique de l’acétylcholine provoque la libération de calci