Enregistrement des potentiels postsynaptiques excitateurs du champ neuronal dans des coupes aiguës de l’hippocampe

Placez une tranche d’hippocampe de souris dans une chambre d’immersion remplie de liquide céphalo-rachidien artificiel, ou aCSF.

Fixez la tranche avec un filet de maintien pour éviter tout mouvement.

Faire circuler en continu l’aCSF oxygéné pour maintenir la viabilité neuronale.

Installez des électrodes de référence pour fournir une référence de tension stable.

Positionnez les électrodes de stimulation et d’enregistrement dans l’alignement et parallèlement à la couche pyramidale CA1 de l’hippocampe.

Appliquez des impulsions électriques.

Ces impulsions stimulent les neurones, provoquant l’ouverture de canaux ioniques voltage-dépendants, permettant aux ions positifs de circuler et déclenchant des potentiels d’action.

Ces potentiels d’action se propagent le long des neurones et induisent la libération de neurotransmetteurs excitateurs dans la fente synaptique.

Les neurotransmetteurs se lient à des récepteurs spécifiques sur les neurones postsynaptiques, permettant un afflux d’ions positifs et entraînant une modification du potentiel membranaire - le potentiel postsynaptique excitateur, ou EPSP.

L’électrode d’enregistrement mesure l’EPSP à partir d’une population de neurones dans la région d’enregistrement - l’EPSP de champ.

Pré-trempez un petit morceau de papier de nettoyage de lentille et un treillis en nylon fixé sur un fil de platine en forme de U dans la chambre de tranche d’immersion pendant quelques minutes. Après cela, retirez le fil de platine en forme de U. Arrêtez le recyclage et placez une tranche sur le papier de nettoyage de l’objectif. Ensuite, placez immédiatement le treillis de maintien de la tranche sur la tranche.

Allumez la pompe et laissez la tranche s’équilibrer pendant 30 minutes sans plonger l’objectif dans l’ACSF. Pendant ce temps, remplissez l’électrode d’enregistrement avec de l’ACSF et montez-la dans le porte-pipette.

Ensuite, placez l’électrode de stimulation en tungstène isolée à l’époxy testée dans le support du manipulateur et le fil de référence dans la chambre de tranche. Ajoutez une deuxième électrode de référence dans la chambre et connectez-la à la prise de référence de l’étage de tête de l’électrode d’enregistrement.

Dans le logiciel de contrôle de l’amplificateur, cliquez sur la case Mode Zero-clamp, puis double-cliquez sur la case Liste des gains de sortie. Choisissez un gain de 100. Double-cliquez sur la boîte de filtre passe-haut bessel. Choisissez 3 kilohertz et double-cliquez sur la zone de liste de liste Filtre passe-bas AC pour choisir 0,1 hertz.

Dans le logiciel d’enregistrement, cliquez sur Acquire Open Protocol. Choisissez un protocole dont les paramètres permettent les stimulations épisodiques et la numérisation des potentiels amplifiés à 10 à 20 kilohertz pendant 50 à 100 millisecondes, et qui déclenche automatiquement un isolateur de stimulus 10 millisecondes après le début d’un enregistrement épisodique.

Placez les électrodes de stimulation et d’enregistrement en ligne et parallèlement à la couche pyramidale. Ensuite, cliquez sur Acquérir le protocole d’édition et choisissez l’onglet Déclencheur dans la fenêtre contextuelle. Cliquez sur la case Source du déclencheur et choisissez la barre d’espace comme source du déclencheur. Ensuite, cliquez sur le bouton OK et cliquez sur le bouton Enregistrer pour démarrer l’acquisition.

Dans le logiciel d’isolateur de stimulus, cliquez sur le boîtier de contrôle de tension et entrez zéro. Cliquez sur le bouton Télécharger. Ensuite, cliquez sur la fenêtre Logiciel d’enregistrement et appuyez sur la barre d’espace. Répétez ce cycle en saisissant séquentiellement des valeurs de 1 000 à 8 000. Corrélez la force de stimulation avec les valeurs de pente FEPSP et déterminez la force de stimulation nécessaire pour obtenir 40 % de la pente maximale FEPSP. Cliquez sur la case Contrôle de tension et entrez la valeur déterminée. Ensuite, cliquez sur le bouton Télécharger.

Dans le logiciel d’enregistrement, cliquez sur le bouton Arrêter, puis sur le menu Acquérir. Cliquez sur Modifier le protocole et choisissez l’onglet Déclencheur dans la fenêtre contextuelle. Ensuite, cliquez sur la case Source du déclencheur et choisissez la minuterie interne comme source de déclenchement. Cliquez sur le bouton OK, puis sur le bouton Enregistrer qui démarre l’enregistrement automatique des potentiels de champ toutes les 60 secondes. Cliquez sur le bouton Arrêter après 30 à 60 minutes.

Dans le logiciel d’enregistrement, cliquez sur Acquérir un protocole ouvert et choisissez le même protocole que l’enregistrement de référence. Cliquez sur le bouton OK, puis sur Enregistrer. Continuez à exécuter automatiquement les enregistrements potentiels sur le terrain pendant deux à quatre heures. Une fois l’enregistrement terminé, cliquez sur le bouton Arrêter pour mettre fin à l’enregistrement.