JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 3:10 min • July 8th, 2025
Commencez avec une souris anesthésiée adaptée à l’obscurité.
Appliquez des gouttes anesthésiques et dilatantes sur la cornée.
Placez la souris sur une plate-forme surélevée devant un dôme avec une faible lumière rouge.
Fixez une électrode de terre par voie sous-cutanée sur la patte arrière et une électrode de référence à l’intérieur de la bouche.
Prenez un porte-électrode avec un capillaire rempli de solution saline. Effleurez pour éliminer les bulles d’air.
Remplissez complètement l’embout capillaire avec la solution saline.
Positionnez le capillaire sur la cornée pour enregistrer un électrorétinogramme à couplage direct ou DC-ERG.
Le DC-ERG mesure les réponses électriques subtiles de l’épithélium pigmentaire rétinien ou EPR.
L’EPR est une monocouche cellulaire spécialisée qui maintient la santé et l’intégrité structurelle des cellules photoréceptrices.
Appliquez une goutte de lubrifiant pour les yeux pour maintenir la conductivité et prévenir la dessiccation.
Vérifiez les valeurs de résistance de chaque œil pour vous assurer qu’elles sont similaires et dans la plage.
Établissez une base de référence stable, puis commencez à enregistrer le DC-ERG.
Pour positionner la souris et les électrodes pour une expérience, anesthésez la cornée d’une souris sous sédation avec une goutte d’acide chlorhydrique de proparacaïne à 0,5 % avant de dilater la cornée avec une goutte de chlorhydrate de phényléphrine à 2,5 % et de tropicamide à 0,5 %.
Utilisez l’étape un sur six pour allumer une faible lumière rouge à l’intérieur du dôme et placez la souris sur une table d’enregistrement chauffée. Utilisez une pince pour tâter soigneusement la peau de la patte arrière, et en utilisant une main pour tenir fermement l’électrode de l’aiguille, utilisez l’autre main pour insérer l’électrode sous-cutanée dans la patte arrière afin de fixer l’électrode en place.
Placez l’électrode de référence argent/chlorure d’argent dans la bouche de l’animal de manière à ce que la pastille centrée repose le long de la joue arrière et soit maintenue en place derrière les dents.
Avant de placer les électrodes capillaires sur l’œil, positionnez le porte-électrode avec les capillaires en verre orientés verticalement et effleurez le porte-électrode avec un index pour éliminer les bulles qui auraient pu être introduites.
Utilisez une aiguille de calibre 25 pour remplir les pointes capillaires avec HBSS et inspectez les capillaires pour vous assurer qu’il n’y a pas de bulles d’air piégées dans les pointes. Positionnez le support porte-électrode de manière à ce que les extrémités ouvertes des capillaires remplis de HBSS soient en contact doux avec la cornée, et en prenant soin de ne pas introduire de bulles, retournez le distributeur de gel lubrifiant pour les yeux pour jeter les gouttes initiales. Ensuite, placez une goutte de gel lubrifiant pour les yeux sur chaque œil pour maintenir la conductivité et éviter la dessiccation pendant l’enregistrement.