Enregistrements électrophysiologiques de la drosophile sensille en réponse aux odorants volatils

Montez une mouche drosophile vivante dans un tube avec la tête exposée, les antennes collées à du ruban adhésif et fixées par une tige de maintien.

Maintenez la préparation sous un flux constant d’air humidifié pour éviter la dessiccation.

Insérez l’électrode de référence à travers le clypeus, une structure de support protégeant les pièces buccales, pour atteindre le système circulatoire.

Placez l’électrode d’enregistrement près du sensillum, l’organe sensoriel de l’insecte.

Insérez l’électrode dans la base du sensil.

Enregistrez les signaux avec des pointes spécifiques pour confirmer le bon positionnement des électrodes près des neurones des récepteurs olfactifs.

Connectez une cartouche contenant l’odorisant de test au tube de distribution.

Positionnez le tube en visant l’antenne de la mouche, en ajustant la hauteur et la distance des électrodes.

À l’aide du logiciel, réglez le débit d’odeur et la quantité de dosage, puis libérez l’odorant.

Maintenant, enregistrez des signaux électriques pour capturer la réponse neuronale de la mouche à l’odorant.

Pour effectuer des enregistrements, insérez l’électrode de référence dans le clypeus en effectuant un mouvement rapide et fluide. Placez-le juste en dessous de la cuticule où il sera en contact avec l’hémolymphe. Ensuite, abaissez lentement l’électrode d’enregistrement jusqu’à ce qu’elle entre dans le même plan de vue que le sensillum cible. Ensuite, insérez l’électrode d’enregistrement dans la base sensillaire.

Avant de continuer, assurez-vous qu’il y a un rapport signal/bruit élevé, avec des pics identifiables des neurones at4A et at4C. Le neurone at4A ne doit pas se déclencher plus vite que 20 hertz.

Maintenant, connectez la cartouche au tube de distribution d’odorisant. Dans ce cas, une cartouche d’acide palmitoléique est attachée. Ensuite, utilisez le micromanipulateur pour manœuvrer la cartouche vers la préparation tout en la visant vers la tête. Positionnez l’embout de la cartouche en pointant directement vers l’antenne à une distance d’environ 4 millimètres. La cartouche doit également être à environ 1 millimètre au-dessus de la glissière.

La cartouche peut être étroitement bordée par les électrodes et la glissière. Idéalement, il doit être à au moins quatre millimètres de l’une ou l’autre des électrodes. Pour la stimulation, réglez le régulateur de débit d’odorisant sur des rafales de 500 millisecondes et utilisez un débit de 500 millilitres par minute. Pour chaque rafale de stimulus, enregistrez l’activité électrique pendant 10 secondes.