Stimulation des racines nerveuses auditives et enregistrements de courant postsynaptique dans une tranche de coin cérébral de souris

Fixez une tranche de cerveau de souris transgénique dans une chambre d’enregistrement perfusée avec de l’aCSF oxygéné.

Le côté cunéiforme plus épais contient la racine nerveuse auditive et le noyau cochléaire, y compris les cellules buissonnantes stellaires T et globulaires.

Le côté le plus mince contient le noyau médial et ventral du corps trapézoïdal avec des neurones olivocochléaires médians fluorescents.

Localisez au microscope la racine nerveuse auditive et positionnez-y une électrode de stimulation.

Identifiez un neurone olivocochlaire médian fluorescent et avancez une pipette d’enregistrement vers lui.

Patchez le neurone pour obtenir une configuration de cellule entière et enregistrez son activité électrique.

Appliquez des impulsions électriques à la racine nerveuse auditive, activant les cellules du noyau cochléaire.

Les cellules stellaires T activées libèrent des neurotransmetteurs excitateurs vers les neurones olivocochlaires médians.

Cependant, les cellules buissonnantes globulaires activent des voies inhibitrices, libérant des neurotransmetteurs inhibiteurs vers les neurones olivocochlaires médians.

L’intégration des signaux excitateurs et inhibiteurs entraîne des courants postsynaptiques, confirmant l’activité neuronale au sein de la tranche.

Pour configurer la tranche cunéiforme pour l’analyse électrophysiologique, placez l’échantillon dans une chambre d’enregistrement qui est perfusée en continu avec 35 degrés Celsius aCSF et stabilisez la tranche. À l’aide de l’optique DIC, concentrez-vous sur la racine nerveuse auditive sur le côté épais de la tranche et utilisez un micromanipulateur pour déplacer l’électrode bipolaire stimulant le tungstène vers la racine nerveuse auditive et doucement à la surface du tissu.

Déplacez le champ de vision vers le noyau ventral du corps trapézoïdal sur le côté mince et sélectionnez un neurone olivocochlaire médian comme cible pour l’électrophysiologie patch-clamp sous épifluorescence à l’aide d’un filtre d’émission de 561 nanomètres. Remplissez une pipette d’enregistrement avec la solution interne appropriée pour l’expérience proposée, et sous l’optique DIC, patchez et enregistrez à partir du neurone olivocochlaire médian dans la configuration de cellule entière.

Ajustez l’amplitude de stimulation électrique de la racine nerveuse auditive pour obtenir des événements postsynaptiques cohérents dans le neurone olivocochéaire médial. Ensuite, exécutez des protocoles de stimulation appropriés pour observer les courants synaptiques évoqués dans les neurones olivoco-choc-léaires médiaux.