Enregistrement des réponses synaptiques CA3-CA1 dans une tranche d’hippocampe de rat

Placez une tranche d’hippocampe de rat dans une installation d’électrophysiologie.

Positionnez les électrodes de stimulation dans la couche radiale de la région CA1 de l’hippocampe, qui reçoit les projections axonales des neurones CA3.

Placez une électrode d’enregistrement près des dendrites apicales CA1.

Placez une autre électrode d’enregistrement dans la couche pyramidale.

Lors de la stimulation, les projections axonales CA3 se dépolarisent et génèrent des potentiels d’action, libérant des neurotransmetteurs excitateurs.

Ces neurotransmetteurs se lient aux dendrites apicales postsynaptiques CA1, induisant un afflux d’ions positifs et une dépolarisation membranaire, appelée potentiel postsynaptique excitateur, ou EPSP.

L’électrode d’enregistrement mesure la somme des EPSP à partir des dendrites apicales - l’EPSP de champ ou fEPSP. Une fois que des signaux fEPSP stables sont obtenus, abaissez les électrodes et faites une brève pause.

Appliquez une gamme d’intensités de stimulation pour déterminer la relation entrée-sortie avec la pente fEPSP, puis sélectionnez et appliquez une intensité spécifique en fonction de la pente.

La deuxième électrode d’enregistrement mesure les potentiels d’action combinés des corps cellulaires neuronaux CA1, générant des pics de population.

Dans les expériences de marquage et de capture synaptiques, au microscope, positionnez les deux électrodes de stimulation dans la couche radiale de la région CA1 pour stimuler les fibres collatérales de Schaffer et une électrode d’enregistrement dans la région dendritique apicale de CA1 à mi-chemin entre les électrodes de stimulation pour enregistrer les réponses fEPSP.

Placez une autre électrode d’enregistrement dans la couche pyramidale pour enregistrer le pic de population. Lorsque toutes les électrodes touchent la tranche, effectuez un test de stimulation pour vous assurer qu’un signal EPSP de champ approprié peut être obtenu dans les deux entrées.

Une fois qu’un signal fEPSP approprié est obtenu, abaissez soigneusement les électrodes d’environ 200 microns à l’aide des boutons de mouvement fins des manipulateurs, puis laissez 20 minutes pour que la tranche se rétablisse. Après cela, déterminez la relation entrée/sortie en mesurant la pente du champ EPSP sur une plage d’intensités de courant de 20 microampères à 100 microampères.

Ensuite, pour chaque entrée, réglez l’intensité de stimulation qui évoque 40 % de la pente maximale de l’EPSP du champ comme stimuli constants tout au long de l’expérience. Après 15 à 20 minutes, commencez à enregistrer la ligne de base.

Enregistrez une ligne de base stable d’au moins 30 à 60 minutes avant l’induction de la LTP/LTD.