Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Fixez une Drosophila melanogaster génétiquement modifiée anesthésiée sur le côté à une lamelle.
Étendez ses pattes antérieures et fixez-les pour exposer les segments tarsiens.
Ces segments ont des neurones gustatifs exprimant des complexes indicateurs de calcium qui deviennent fluorescents sous forme liée au calcium.
Tirez une barrière hydrophobe autour de la mouche pour retenir la solution.
Laissez la mouche récupérer et superposez une solution saline tamponnée sur les segments de tarse exposés pour les humidifier.
Sous un microscope confocal, observez les segments tarsiens et imagez les neurones gustatifs à différentes profondeurs pour obtenir une fluorescence de pré-stimulation.
Ajoutez une solution de stimulation contenant des ligands lipophiles sur le segment.
Ces ligands se lient aux récepteurs gustatifs des neurones, initiant des voies de signalisation et déclenchant l’ouverture des canaux calciques.
Cela permet aux ions calcium du liquide extracellulaire de pénétrer dans le cytoplasme et de se lier aux complexes indicateurs de calcium, ce qui entraîne une émission de fluorescence.
Lorsqu’elle est observée à nouveau, une augmentation de la fluorescence neuronale confirme la
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