Analyse du recyclage des vésicules synaptiques et de l’absorption de colorant fluorescent chez les larves de drosophile

Placez une préparation neuromusculaire de larve de drosophile vivante dans une chambre d’enregistrement contenant une solution saline sans calcium.

Les neurones larvaires expriment un canal cationique sensible à la lumière.

Passez à une solution saline de calcium ajouté contenant un colorant fluorescent.

Le colorant est faiblement fluorescent à l’état non intériorisé, mais fortement lorsqu’il est intériorisé par les neurones.

Illuminez la larve avec de la lumière bleue.

Cela active le canal, induisant un afflux de cations et une dépolarisation des neurones, initiant un potentiel d’action.

Le potentiel d’action atteint la terminaison synaptique au niveau de la jonction neuromusculaire, permettant l’afflux de calcium et l’exocytose vésiculaire.

Par la suite, la membrane liée au colorant est internalisée lors du recyclage des vésicules.

Laver avec une solution saline sans calcium pour arrêter le recyclage des vésicules et éliminer tout colorant non internalisé.

Visualisez le signal de fluorescence.

Ensuite, introduisez une solution saline sans colorant et ajoutez du calcium, puis illuminez à nouveau.

Cela induit un autre potentiel d’action, l’afflux de calcium et l’exocytose des vésic