JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurosciences
0 vues • 3:50 min • July 8th, 2025
Fixez une tranche de cerveau avec la région cible dans une chambre d’enregistrement.
Positionnez une pipette d’enregistrement contenant une solution interne sur un neurone postsynaptique et obtenez une configuration de cellule entière.
Introduisez une pipette patch de recherche près d’un neurone présynaptique.
Cette pipette est remplie d’une solution à base de sodium pour prévenir la dépolarisation des neurones lors de la recherche de la cellule présynaptique.
Utilisez une aspiration douce pour établir une configuration de joint lâche avec la pipette de recherche.
Maintenez le potentiel membranaire et appliquez de grandes impulsions de courant pour déclencher un potentiel d’action dans le neurone présynaptique.
Surveiller la réponse postsynaptique à cette stimulation.
Si aucune réponse n’est détectée, patchez un autre neurone présynaptique et répétez la stimulation.
Continuez ce processus jusqu’à ce qu’une réponse soit observée dans le neurone postsynaptique.
Remplacez la pipette de recherche par une pipette enregistreuse et établissez une configuration de cellule entière dans le neurone présynaptique.
Appliquez des impulsions de courant pour susciter des potentiels d’action dans le neurone présynaptique et enregistrez la réponse postsynaptique.
Après avoir préparé des tranches de la région cible, laissez-les incuber. Pendant ce temps, tirez sur les pipettes du patch, qui doivent avoir une tige longue et fine. Après avoir fixé une tranche de cerveau avec une harpe en platine dans une chambre expérimentale, remplissez une pipette d’enregistrement avec une solution interne.
Placez la pipette dans le préamplificateur et patchez un neurone postsynaptique putatif en mode cellule entière. À l’aide d’une pipette patch de recherche d’une résistance de 8 à 10 mégaohms remplie d’une solution interne dans laquelle les sels de potassium sont remplacés par des sels de sodium, appliquez une légère aspiration à la pipette de recherche pour patcher un neurone présynaptique potentiel dans une configuration attachée à cellules libres.
Maintenez le potentiel de membrane sous le joint lâche entre moins 30 et moins 60 millivolts en mode pince de courant. Ensuite, appliquez de grandes impulsions de courant de 0,2 à 2 nanoampères pour susciter un potentiel d’action dans la cellule présynaptique potentielle.
Observez ce potentiel d’action sous la forme d’un petit pic allumé sur la réponse de tension. Réglez la fréquence de stimulation sur 0,1 Hertz pour éviter l’épuisement de la réponse postsynaptique. Si le neurone postsynaptique ne répond pas à la stimulation du neurone potentiellement présynaptique testé, patchez un nouveau neurone présynaptique potentiel en mode de fermeture lâche.
Testez ainsi jusqu’à 30 neurones potentiellement présynaptiques, en continuant à utiliser la même électrode patch de recherche tant qu’un joint avec une résistance supérieure à 30 mégaohms peut être établi.
Si la stimulation en mode d’étanchéité lâche entraîne un EPSP ou un IPSP avec une latence inférieure à cinq millisecondes dans le neurone postsynaptique, retirez la pipette de recherche du neurone présynaptique.
À l’aide d’une électrode de patch d’enregistrement remplie de biocytine contenant une solution interne régulière d’une résistance de quatre à huit mégaohms, patchez le neurone présynaptique et enregistrez en mode pince de courant de cellule entière. Susciter des potentiels d’action par injection de courant dans les neurones présynaptiques et enregistrer la réponse postsynaptique.