Évaluation des synapses en ruban dans des régions de fréquence spécifiques de la cochlée de souris

Commencez par des tubes contenant des spires cochléaires de souris prétraitées avec un agent perméabilisant et un agent bloquant qui empêchent les interactions non spécifiques.

Chaque tour détecte différentes fréquences sonores et contient des cellules ciliées qui convertissent le son en signaux électriques. Ces signaux sont transmis au nerf auditif par l’intermédiaire de neurotransmetteurs en synapses en ruban.

Retirez la solution et ajoutez des anticorps primaires qui interagissent avec les protéines des cheveux et des cellules nerveuses au niveau des synapses du ruban, puis lavez.

Incuber avec des anticorps secondaires marqués avec des fluorophores rouges et verts, qui se lient à leurs anticorps primaires.

Laver pour éliminer les anticorps secondaires non liés.

Placez l’échantillon sur une lame de verre avec un support de montage contenant un colorant nucléaire pour colorer les noyaux en bleu.

Montez la lamelle. Séchez-le, puis utilisez un microscope confocal pour imager chaque segment à différentes profondeurs.

Les synapses en ruban apparaissent sous forme de puncta rouges et vertes rapprochées.

Comptez ces points fonctionnels à chaque tour pour corréler leur réponse à la fréqu