Évaluation des interactions entre les neurones glutamatergiques et les cellules de gliome dans une co-culture

Commencez avec un dispositif microfluidique compartimenté recouvert de laminine et positionné sur un réseau multiélectrodes à motifs ou MEA.

Le dispositif transporte des neurones glutamatergiques corticaux dérivés d’iPSC cultivés et collés à des microélectrodes d’un MEA.

Ces neurones communiquent via des signaux électriques. Enregistrez ces signaux en tant qu’activité neuronale de base.

Ensuite, ensemencez l’appareil avec des cellules de gliome pédiatrique de haut grade riches en glutamate, un type de cellule tumorale cérébrale, et incubez.

Au fil du temps, les cellules de gliome pénètrent dans le canal et se fixent, établissant la co-culture. Plus tard, les cellules de gliome libèrent du glutamate, un neurotransmetteur excitateur.

Le glutamate libéré interagit avec les récepteurs neuronaux, entraînant un afflux d’ions calcium et sodium qui provoque une dépolarisation de la membrane neuronale.

Cela induit l’excitabilité neuronale et améliore l’activité neuronale.

Réenregistrez les signaux électriques, et une augmentation significative après la co-culture indique une interaction réussie entre les neurones et les cellules de gliome.

Ensemencez les cellules UW479 et BT35 trypsinisées sur les neurones glutamatergiques adhérents matures dans chaque dispositif microfluidique dédié. Maintenez les co-cultures pendant deux jours dans un environnement contrôlé à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone avec le neurone glutamatergique D11 et le milieu suivant.

Comptez les cellules de gliome pédiatrique de haut grade à l’aide des images microscopiques analysées avec le logiciel d’analyse d’images pour évaluer leur viabilité et calculer le pourcentage de cellules. Placez le MFD dans l’appareil d’enregistrement et utilisez un logiciel disponible dans le commerce pour effectuer l’enregistrement électrophysiologique des neurones glutamatergiques le 21e jour.

Avant d’ensemencer des cellules de gliome pédiatrique de haut grade, effectuer un deuxième enregistrement électrophysiologique des neurones glutamatergiques différenciés cultivés comme contrôle, parallèlement à la co-culture.