Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:45 min • July 8th, 2025
Prenez les neurones corticaux primaires du rat dans une boîte à fond de verre recouverte de polymère.
Fixez les neurones avec du paraformaldéhyde pour préserver les structures cellulaires.
Lavez l’excès de paraformaldéhyde.
Ajoutez un détergent non ionique pour perméabiliser les cellules.
Traitez les cellules avec une coloration fluorescente verte ciblant la protéine structurelle actine filamenteuse, ou F-actine.
Enlevez l’excès de tache.
Appliquez un agent bloquant pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.
Incuber avec des anticorps primaires qui ciblent les protéines dendritiques.
Retirez les anticorps non liés.
Ajoutez des anticorps secondaires conjugués au fluorophore rouge pour se lier aux anticorps primaires. Lavez l’excès d’anticorps.
Appliquez un colorant fluorescent pour colorer les noyaux. Retirez le colorant non lié.
Ajouter un réactif anti-décoloration pour éviter le photoblanchiment aux fluorophores.
À l’aide de la microscopie fluorescente, capturez des images des neurones.
Identifiez une région riche en F-actine dans la dendrite marquée.
À l’aide d’un logiciel, comptez les points ou les taches d’actine F et tracez manuellement la longueur de la dendrite po
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