Modélisation des lésions neuronales dans les neurones granulaires cérébelleux primaires de souris

Commencez par une culture de neurones granulaires cérébelleux primaires de souris.

Ajoutez de fortes concentrations de N-méthyl-D-aspartate, ou NMDA, un agoniste des récepteurs des neurotransmetteurs excitateurs, et de glycine, un co-agoniste. Incuber la culture.

Le NMDA et la glycine se lient à leurs sites respectifs sur les récepteurs NMDA, entraînant une surstimulation et provoquant un afflux massif d’ions calcium.

L’augmentation du calcium intracellulaire active les phospholipases dépendantes du calcium, qui dégradent les phospholipides de la membrane cellulaire, entraînant des dommages à la membrane.

De plus, le calcium intracellulaire active les protéases qui dégradent les protéines cellulaires.

Les niveaux élevés de calcium induisent également un stress et une fragmentation mitochondriaux, entraînant la libération d’espèces réactives de l’oxygène, ou ROS, et provoquant un stress oxydatif.

De plus, le calcium intracellulaire active les DNases, qui, avec les ROS, causent des dommages à l’ADN, entraînant finalement la mort neuronale.

Remplacez le milieu par un milieu frais sans NMDA ni glycine pour arrêter la cascade de signalisation.

Le modèle de lésion neuronale induite par NMDA est prêt pour une analyse plus approfondie.

Pour induire une excitotoxicité neuronale avec le NMDA, après sept jours in vitro, traitez les neurones granulaires cérébelleux avec 100 micromolaires de NMDA et 10 micromolaires de glycine pendant une heure. Ensuite, remplacez le milieu par un milieu conditionné à partir des cultures parallèles sans traitement. Cette concentration entraîne 50 % de la mort cellulaire 24 heures après le traitement.