Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:59 min • July 8th, 2025
Prenez une suspension de cytomégalovirus murin, génétiquement modifiée pour exprimer une protéine fluorescente verte améliorée, permettant la visualisation.
Chargez la suspension dans une seringue à l’aide d’une aiguille attachée.
Ensuite, anesthésiez un bébé souris en le plaçant sur de la glace.
Identifiez le site d’injection sur la tête du chiot.
Insérez l’aiguille perpendiculairement à la surface du crâne jusqu’à ce qu’elle atteigne le ventricule latéral, un liquide céphalo-rachidien ou une cavité remplie de LCR dans le cerveau.
Injectez la suspension dans le ventricule latéral.
Laissez le chiot récupérer.
Le virus injecté circule dans le LCR ventriculaire, atteignant les cellules épendymaires de la zone marginale et les cellules épithéliales du plexus choroïde.
Le virus se fixe aux récepteurs de surface de ces cellules, s’internalise, subit une réplication et se propage d’une cellule à l’autre, établissant une infection aiguë dans le plexus choroïde, la zone marginale et la zone sous-ventriculaire.
Commencez par stériliser une seringue de 10 microlitres et une aiguille de calibre 27 avec de l’alcool à 70 %. Ensuite, chargez 5 microlitres de solution d’injection de cytomégalovirus murin ou de microbilles fluorescentes dans l’aiguille en tirant avec précaution sur le piston de la seringue.
Après avoir anesthésié et immobilisé une souris néonatale P0,5 en la plaçant sur de la glace pendant trois à quatre minutes, utilisez la méthode de réponse par pincement des orteils pour déterminer la profondeur de l’anesthésie. Marquez le site d’injection sur la souris anesthésiée avec un stylo de laboratoire non toxique à un endroit d’environ 0,7 à 1,0 millimètre latéral de la suture sagittale et de 0,7 à 1,0 millimètre caudal du bregma néonatal. Ce schéma montre le site plus en détail.
À titre de référence, marquez à 2 millimètres de la pointe de l’aiguille avec un marqueur non toxique. Ensuite, insérez l’aiguille à 2 millimètres de profondeur, perpendiculairement à la surface du crâne au site d’injection marqué. Ensuite, injectez lentement 5 microlitres de cytomégalovirus murin dans le ventricule latéral sans ouvrir le cuir chevelu.
Dans un autre groupe de souris, injectez une solution de 5 microlitres contenant des microbilles fluorescentes par la même méthode. Après l’injection, laissez l’aiguille en place pendant 10 à 20 secondes pour éviter le reflux. Ensuite, retirez lentement l’aiguille. Laisser les animaux injectés récupérer pendant 5 à 10 minutes dans un récipient chaud jusqu’à ce que le mouvement et la réactivité générale soient rétablis.