Immunoprécipitation de complexes protéine-ADN cibles à partir d’un lysat de motoneurone

Commencez avec un tube contenant des billes magnétiques prétraitées enrobées d’anticorps spécifiques à une protéine cible réticulé à l’ADN.

Ajoutez un lysat de motoneurone contenant des fragments d’ADN et incubez avec agitation.

Les fragments d’ADN interagissent avec les billes enrobées d’anticorps, formant des complexes perles-ADN.

Centrifugeuse pour recueillir le liquide du capuchon et le placer sur un séparateur magnétique pour précipiter les complexes billes et ADN.

Retirez le surnageant contenant des fragments d’ADN non liés.

Introduire un tampon de lyse à base de détergent pour solubiliser les fragments d’ADN non spécifiquement liés.

Centrifuger et effectuer la séparation magnétique, puis retirer le surnageant.

Laver avec un tampon à haute teneur en sel pour perturber les interactions non spécifiques. Centrifugez, effectuez la séparation magnétique et retirez le surnageant.

Laver avec un tampon LiCl pour éliminer les interactions non spécifiques restantes. Centrifugez, effectuez la séparation magnétique et retirez le surnageant.

Enfin, lavez avec un tampon Tris-HCl, centrifugez et effectuez la séparation magnétique.

Retirez le surnageant et collectez les billes contenant les