Immunomarquage par fluorescence de tranches d’organoïdes cérébelleux

Prenez des sections d’organoïdes cérébelleux fixes comprenant des types distincts de neurones cérébelleux.

Lavez les sections dans un tampon pour éliminer les résidus de support d’enrobage.

Incuber dans la glycine pour bloquer les sites réactifs résiduels de fixation, réduisant ainsi la liaison non spécifique pendant l’immunomarquage.

Ajoutez un détergent non ionique pour perméabiliser les cellules.

Laver avec un tampon en enlevant l’excès de détergent.

Maintenant, séchez la lame. Transférez-le dans une boîte d’immunocoloration avec du papier imbibé de tampon pour éviter le dessèchement des tissus.

Appliquez une solution bloquante qui se lie à des sites non spécifiques sur les neurones.

Retirez la solution de blocage. Incuber avec des anticorps primaires, qui se lient aux antigènes ciblés dans les neurones cérébelleux.

Laver avec un tampon, en éliminant les anticorps non liés.

Incuber avec des anticorps secondaires liés aux fluorophores pour se lier aux anticorps primaires liés à l’antigène.

Ensuite, lavez avec un tampon, en éliminant les anticorps non liés.

Ajoutez un colorant pour colorer les noyaux cellulaires.

À l’aide de la microscopie à fluorescence, visualisez les marqueurs