Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:47 min • July 8th, 2025
Prenez une plaque multipuits contenant des organoïdes cérébraux humains dans un milieu d’induction neuronale.
Les organoïdes contiennent des cellules souches, des cellules gliales radiales, des cellules progénitrices neurales ou NPC et des neurones disposés selon un motif radial appelé rosette, imitant le cerveau en développement.
Retirez le milieu et lavez les organoïdes avec un tampon.
Ajoutez le virus Zika en suspension dans une mémoire tampon aux puits de test et uniquement la mémoire tampon aux puits de contrôle.
Incuber, permettant au virus de se lier à ses récepteurs sur les NPC et de s’internaliser.
Lavez pour éliminer les virus non internalisés, puis ajoutez un nouveau milieu d’induction neurale et incuberez.
Les virus internalisés utilisent la machinerie de la cellule hôte pour former de nouvelles particules virales.
La multiplication virale déclenche une réponse de stress cellulaire qui induit l’apoptose, réduisant ainsi le nombre de NPC disponibles pour le développement d’organoïdes.
Au fil du temps, les organoïdes infectés présentent une taille réduite et une morphologie perturbée, reflétant un développement cérébral anormal chez les humains infectés par le virus Zika.
Apportez la solution saline équilibrée 1X d’Earle, le PBS 1X et le milieu d’induction neurale à 37 degrés Celsius dans un bain d’eau chaude. Ensuite, diluez le virus Zika d’une concentration connue dans la solution d’Earle 1X à la multiplicité cible de l’infection qui est généralement comprise entre 0,1 et 10. À l’aide d’une pipette P200, retirez soigneusement tout le milieu de chaque organoïde, puis lavez rapidement les organoïdes avec 200 microlitres de PBS 1X chaud.
Lors du retrait du milieu de chaque puits, il est essentiel de ne pas toucher l’organoïde ou de ne pas l’aspirer dans la pipette. Cela peut causer des dommages irréparables à l’organoïde. Si cela se produit, il est préférable de jeter l’organoïde.
Ensuite, retirez soigneusement tout le liquide restant de chaque puits organoïde à l’aide d’une pipette P200 monocanal. Ensuite, ajoutez rapidement 50 microlitres de 1 solution d’Earle pour une infection simulée ou de solution de virus Zika dans chaque puits. Assurez-vous que chaque organoïde est complètement immergé. Une fois terminé, remettez l’assiette dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant deux heures.
Une fois l’exposition virale terminée. Lavez chaque puits des organoïdes avec 200 microlitres de PBS. Laissez les organoïdes reposer pendant 15 secondes, puis retirez le PBS à l’aide d’une pipette P200 monocanal. Enfin, ajoutez 200 microlitres de milieu d’induction neurale frais dans chaque puits et remettez la plaque dans l’incubateur.