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Neurosciences
0 vues • 2:28 min • July 8th, 2025
Prenez des larves de poisson-zèbre anesthésiées dans un plat recouvert de gel d’agarose et assurez-vous que le cerveau est orienté vers le haut pour l’injection.
Placez la parabole sous un microscope pour visualiser les ventricules cérébraux, qui sont des cavités remplies de liquide dans le cerveau en développement.
Prenez une aiguille de micro-injection contenant une solution de lipopolysaccharides, ou LPS, un composant bactérien pour déclencher une réponse immunitaire.
Placez l’aiguille au-dessus du tectum cérébral, une région contenant des neurones et des cellules immunitaires résidentes, en particulier la microglie.
Perforez le cerveau avec l’aiguille et injectez la solution LPS dans le ventricule.
La microglie dans les tissus environnants se lie au LPS par l’intermédiaire de récepteurs de type Toll.
La liaison déclenche la libération de cytokines pro-inflammatoires, qui recrutent des neutrophiles sur le site, entraînant une neuroinflammation.
Les neutrophiles génèrent des rafales d’espèces réactives de l’oxygène et libèrent des enzymes protéolytiques, entraînant la mort neuronale.
Transférez les larves induites par la neuroinflammation dans un milieu de culture afin de les maintenir pour les essais en aval.
Installez le micromanipulateur de manière à ce que la pointe de l’aiguille de l’appareil de micro-injection soit dans le même champ de vision que les larves à fort grossissement. Faites fondre une solution d’agarose à 2 % dans de l’eau doublement distillée à l’aide d’un micro-ondes. Versez l’agarose fondu dans un plat en plastique. À l’aide d’une pipette de transfert en plastique, transportez les larves anesthésiées au centre d’une boîte en plastique recouverte d’agarose à 2 %.
Orientez les larves montées avec le côté cerveau vers le haut pour l’accès à l’aiguille. Ajustez le grossissement du microscope de manière à ce que la structure ventriculaire du cerveau du poisson-zèbre soit clairement affichée dans le champ de vision. Placez l’aiguille avec précaution au-dessus du tectum cérébral. Nettoyez la zone du cerveau avec de l’éthanol à 70 % et percez lentement la peau du cerveau du poisson-zèbre avec la pointe de l’aiguille à l’aide du micromanipulateur.
Appuyez sur la pédale pour éjecter un nanolitre de 1X PBS ou différentes concentrations de lipopolysaccharide. Transférez les larves dans un milieu E3 propre immédiatement après l’injection.