Modélisation de la mort neuronale induite par les espèces réactives de l’oxygène dans les neurones des granules cérébelleux de souris

Prenez une culture de neurones granulaires cérébelleux primaires de souris.

Ajoutez un milieu contenant du peroxyde d’hydrogène, une espèce réactive de l’oxygène ou ROS, et incubez brièvement.

Le peroxyde d’hydrogène se diffuse dans les cellules et est converti en radicaux libres hautement réactifs.

Ces radicaux induisent la peroxydation lipidique, compromettant l’intégrité de la membrane cellulaire.

De plus, les radicaux provoquent des modifications oxydatives dans les protéines cellulaires, altérant leur fonction.

De plus, ils induisent des cassures de l’ADN, conduisant à une instabilité génomique.

Les radicaux causent également des dommages oxydatifs aux organites intracellulaires, y compris les mitochondries.

En réponse, les mitochondries endommagées libèrent du cytochrome c, qui se lie au facteur d’activation de la protéase apoptotique-1, déclenchant la formation d’apoptosomes et la conversion de la pro-caspase-9 en caspase-9 active.

La caspase 9 active les caspases du bourreau, cliver davantage les protéines cellulaires et entraîner la mort neuronale apoptotique.

Remplacez le média par un média frais, sans peroxyde d’hydrogène, pour arrêter la cascade de signalisation.

Pour la mort cellulaire induite par les ROS, traitez les neurones avec du peroxyde d’hydrogène à 75 à 100 micromolaires pendant cinq minutes. Après cinq minutes, passez au milieu conditionné à partir de cultures parallèles.

En raison de l’instabilité du peroxyde d’hydrogène, la concentration doit être optimisée à un niveau qui induit entre 50 % et 70 % de la mort cellulaire après 24 heures. Cette concentration est généralement comprise entre 75 et 100 micromolaires.