Détermination de la toxicité induite par les nanoparticules dans les neurones à l’aide de la microglie comme biocapteur de substitution

Prélever des cultures microgliales dans une plaque multipuits contenant un milieu.

Remplacer la moitié du milieu dans le puits d’essai par un milieu contenant des nanoparticules d’argent, et dans le puits de contrôle par un milieu de véhicule. Couver.

Les microglies internalisent les nanoparticules, s’activent et libèrent des cytokines pro-inflammatoires.

Transférez le milieu véhicule et le milieu conditionné contenant ces cytokines dans des filtres montés sur des tubes de collecte.

Centrifugeuse pour éliminer les nanoparticules, en conservant les cytokines.

Retournez les filtres dans de nouveaux tubes de collecte, centrifugez et récupérez le média. Ajoutez des supports frais.

Ensuite, prenez des cultures neuronales hypothalamiques.

Remplacez la moitié du milieu du puits de contrôle par un milieu de véhicule et le milieu du puits d’essai par un milieu conditionné. Couver.

Les cytokines se lient aux récepteurs des neurones hypothalamiques, activant les voies de signalisation qui induisent la mort neuronale.

Ajoutez resazurin et incuber.

Dans les cellules vivantes, les enzymes déshydrogénases réduisent la résazurine faiblement fluorescente en résorufine fluorescente.

Mesurez la fluor