Lésion mécanique des nerfs segmentaires des larves de drosophile pour induire une neurodégénérescence

Prenez des larves de drosophile du troisième stade et anesthésiez-les à l’aide de dioxyde de carbone.

Au microscope, positionnez les larves avec la face ventrale vers le haut pour visualiser les nerfs segmentaires.

Ces nerfs contiennent des motoneurones qui innervent les muscles de la paroi corporelle et contrôlent le mouvement des larves.

Les terminaisons axonales de ces neurones se connectent aux fibres musculaires pour former des jonctions neuromusculaires ou NMJ.

Les neurones libèrent des neurotransmetteurs qui se lient aux récepteurs des fibres musculaires, provoquant un afflux d’ions et déclenchant la transmission du signal.

À l’aide d’une pince, pincez la cuticule ventrale pour blesser les nerfs segmentaires, inhibant ainsi le mouvement.

Placez les larves blessées sur une plaque de gélose avec de la nourriture pour larves pour assurer leur survie.

Placez l’assiette dans un plat, couvrez-la d’une serviette en papier humide pour maintenir l’humidité et rangez-la dans un récipient pour permettre la récupération des larves.

Avec le temps, la blessure entraîne la mort des motoneurones, connue sous le nom de neurodégénérescence, qui perturbe les NMJ.

Placez chaque larve sur un appareil anesthésiant au CO₂. À l’aide d’un microscope à dissection, roulez soigneusement chaque larve sur sa face dorsale pour visualiser les nerfs segmentaires dans toute la cuticule.

Il est essentiel de rouler soigneusement chaque larve sur sa face dorsale afin de visualiser les nerfs segmentaires à travers la cuticule avant la blessure.

En commençant par les crochets buccaux, positionnez les pinces de taille 5 à environ la moitié aux 2/3 de la longueur des larves. Une fois positionné, pincez environ un tiers de la cuticule ventrale contenant les nerfs segmentaires avec une pince de taille 5. Pour vous assurer que les nerfs segmentaires larvaires sont blessés, appliquez une force suffisante pour écraser les nerfs segmentaires, mais laissez la cuticule intacte. Pour déterminer la bonne quantité de force, écrasez 10 larves et assurez-vous que le taux de mortalité après cinq heures est inférieur à 50 %.

Après la blessure, transférez soigneusement les larves dans une plaque de gélose au jus de fruit contenant environ 0,5 gramme de pâte de levure. Placez chaque larve de manière à ce que son extrémité antérieure soit sur la pâte de levure pour une alimentation continue. Placez des plaques de gélose contenant de la pâte de levure et 10 larves blessées au fond d’une boîte de Pétri vide de 100 x 15 millimètres. Couvrez la boîte de Pétri avec une serviette en papier humide, en veillant à ce que la serviette en papier ne touche pas les larves ou les plaques de gélose. Ensuite, placez la boîte de Pétri dans un récipient hermétique à température ambiante. Enfin, récupérer les larves pour les disséquer après des périodes précises après la blessure.