Génération d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin

Injectez les peptides dérivés de la myéline avec un adjuvant près des ganglions lymphatiques périphériques d’une souris anesthésiée.

Les conjugués peptide-adjuvant activent les cellules présentatrices d’antigènes, ou APC, qui reconnaissent et traitent les peptides.

Les APC migrent ensuite vers les ganglions lymphatiques et activent les lymphocytes T autoréactifs.

Injectez périodiquement la toxine de la coqueluche par voie intrapéritonéale, ce qui perturbe les jonctions serrées entre les cellules endothéliales et augmente la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique.

Les lymphocytes T autoréactifs circulent dans le sang et traversent la barrière hémato-encéphalique pour pénétrer dans le tissu cérébral.

Ces cellules reconnaissent les peptides sur la gaine de myéline et libèrent les cytokines.

Ces cytokines recrutent des macrophages et des lymphocytes B sur le site.

Les macrophages libèrent des espèces réactives de l’oxygène qui endommagent les oligodendrocytes producteurs de myéline, tandis que les lymphocytes B interagissent avec les lymphocytes T, s’activent et produisent des auto-anticorps ciblant la gaine de myéline.

Cela conduit à une démyélinisation, altérant la transmission nerveuse.

Soulevez la queue de la souris ; une chute progressive indique une lésion nerveuse, signalant l’apparition d’une encéphalomyélite auto-immune, ou EAE.

Commencer cette procédure par l’anesthésie des souris C57BL/6 qui ont été logées dans des conditions spécifiques exemptes d’agents pathogènes, comme décrit dans le protocole textuel. Fixez la souris anesthésiée dans une main et injectez 30 microlitres de peptide MOG dans une émulsion adjuvante fluorescente complète par voie sous-cutanée dans chacun des flancs de la patte arrière à proximité des ganglions lymphatiques inguinaux.

Maintenant, placez la souris sur son ventre et injectez 20 microlitres de l’émulsion peptidique MOG dans le tissu adipeux mou à gauche et à droite au niveau de la racine de la queue. Injectez également une petite gouttelette de l’émulsion dans le cou de la souris. Injectez 100 microlitres de solution de toxine coquelucheuse par voie intrapéritonéale dans la souris. Tenez la tête de la souris sous le centre du corps pour éviter l’injection dans l’intestin.

Remplacez le régime d’entretien par le régime d’élevage afin de fournir aux souris une nourriture à plus forte teneur énergétique avant d’endurer la maladie clinique attendue. Répétez l’injection de toxine coquelucheuse 48 heures après le premier traitement.

Vérifiez l’état de santé des souris EAE tous les matins en jetant un coup d’œil à l’intérieur des cages. Évaluez les souris EAE tous les après-midi. Sortez de la cage toutes les souris incluses dans l’expérience EAE et vérifiez si la queue a du tonus.

Déplacez la queue vers le haut avec un doigt. Une souris en bonne santé gardera sa queue relevée. Si l’EAE clinique a commencé, le tonus de la queue sera moins visible par une chute progressive de la queue. Finalement, la souris ne pourra plus du tout lever la queue.