Immunocoloration des tissus craniofaciaux de souris

Prenez des cryosections de tissus craniofaciaux embryonnaires de souris fixes comprenant des cellules de la crête neurale.

Lavez les sections dans un tampon contenant un détergent non ionique pour éliminer le milieu d’enrobage et perméabiliser les membranes, permettant l’accès aux cibles intracellulaires.

Ajout d’une solution de blocage pour saturer les sites de liaison non spécifiques.

Retirez l’excès de solution de blocage. Ensuite, incubez avec des anticorps primaires ciblant les antigènes nucléaires, tels que les facteurs de transcription et les marqueurs de prolifération.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés.

Incuber avec des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores pour se lier aux anticorps primaires liés à l’antigène.

Retirez les anticorps non liés à l’aide d’un tampon.

Ajoutez un milieu anti-décoloration avec un colorant nucléaire fluorescent et recouvrez d’une lamelle.

Le colorant tache les noyaux, et le milieu anti-décoloration protège les signaux fluorescents pendant l’imagerie.

Imagez les coupes au microscope à fluorescence pour évaluer l’expression et la localisation des marqueurs nucléaires, indiquant la prolifération des cellules de la c