Visualisation des motilités vésiculaires dans les neurones à l’aide de l’imagerie par fluorescence

Prenez le plasmide souhaité dans un milieu sans sérum. Ce plasmide code pour des protéines spécifiques aux vésicules avec des marqueurs fluorescents.

Dans un autre tube, prélever le réactif de transfection dilué dans un milieu sans sérum.

Mélangez les deux solutions et incuberez.

Le réactif de transfection se combine avec le plasmide, formant un complexe.

Prenez un puits contenant des neurones adhérents dans le milieu avec du sérum. Ajoutez les complexes et incuberez. Le complexe facilite l’entrée du plasmide dans la cellule.

Jetez le support pour éliminer les complexes non internalisés.

Ajoutez du milieu frais, puis incubez.

Le plasmide pénètre dans le noyau pour être transcrit et est ensuite traduit en protéines fluorescentes spécifiques aux vésicules qui marquent les vésicules dans les neurones.

À l’aide d’un microscope à fluorescence à température contrôlée, acquérir des images à des intervalles de temps spécifiés.

Pour analyser les images, définissez les paramètres de suivi.

Identifiez la vésicule d’intérêt et notez ses coordonnées dans chacune des images.

Compilez les données pour visualiser le mouvement de la vésicule.

Dans cette procédure, mélangez 4 microgrammes de plasmid