Établir une infection active par le VIH dans un modèle de rat

Commencez par un rat anesthésié, désinfectez son crâne rasé et fixez-le dans un appareil stéréotaxique.

Faites une incision médiane pour exposer le crâne.

Marquez deux positions sur le crâne et percez de petits trous.

Fixez une seringue avec des virus chimériques contenant de l’ARN écotrope du VIH dans un vecteur lentiviral à l’appareil stéréotaxique.

Insérez l’aiguille dans le trou, en ciblant les cellules du cortex cérébral, y compris la microglie, les cellules immunitaires du cerveau.

Injectez lentement les virus pour leur répartition uniforme dans le cortex.

Après l’injection, suturez l’incision, désinfectez la zone et permettez au rat de récupérer.

Le virus injecté interagit avec les récepteurs des cellules cérébrales, fusionne et libère l’ARN du VIH dans le cytoplasme.

L’ARN est transcrit inversement en ADN et s’intègre dans l’ADN de la cellule.

La cellule infectée exprime les composants viraux, produisant de nouveaux ARN et protéines.

Ceux-ci s’assemblent et se libèrent sous forme de nouveaux virus, ce qui augmente la charge virale dans le cerveau, établissant une infection active par le VIH.

Pour l’injection d’EGFP EcoHIV, après avoir confirmé une absence de réponse au réflexe de pédale, rasez les poils de la région du cerveau et stérilisez la peau exposée 2 fois avec de l’éthanol à 70 % et un gommage à base de chlorhexidine. Fixez le rat en position couchée dans un appareil stéréotaxique et faites une incision de 5 à 6 centimètres à travers la peau le long de la ligne médiane du cuir chevelu.

Marquez une position de forage à 0,8 millimètre latéral et une de 1,2 millimètre rostrale à bregma, et percez un trou de 0,4 millimètre de diamètre à chaque position du crâne. Chargez 1,04 fois 10 à la sixième unité de transduction par millilitre de solution de lentivirus EcoHIV titrée dans une seringue d’injection de 10 microlitres, et fixez la seringue à l’appareil stéréotaxique.

Déplacez l’aiguille près de la surface d’un trou de perçage et insérez l’aiguille à 2,5 millimètres dans le trou. Perfaction de 1 microlitre de solution virale à raison de 0,2 microlitre de virus par minute. Lorsque tout le virus a été injecté, laissez l’aiguille à l’intérieur de la zone d’injection pendant cinq minutes avant de rétracter lentement l’aiguille jusqu’à ce qu’elle soit à l’extérieur du crâne du rat.

Fermez l’incision cutanée avec une suture en fil de soie 4-0 et stérilisez la solution avec de l’éthanol à 70 %. Ensuite, placez le rat dans une chambre de récupération avec un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce qu’il décubitule.