Coloration immunofluorescente de sialoglycoprotéines dans des cellules et des neurones progéniteurs neuraux

Prenez les cellules souches et progénitrices neurales primaires et les neurones, qui ont des sialoglycoprotéines marquées par un rapporteur d’acide sialique.

Ajouter du paraformaldéhyde pour fixer les cellules. Éliminer l’excès de paraformaldéhyde à l’aide d’un tampon.

Incuber avec un mélange réactionnel contenant des sondes chimiques à base de biotine, un agent réducteur et un catalyseur à base de métal.

L’agent réducteur active le catalyseur, facilitant la biotinylation des sialoglycoprotéines.

Retirez le mélange réactionnel et lavez-le avec un tampon. Ajoutez de la streptavidine conjuguée aux fluorophores pour lier les sialoglycoprotéines biotinylées.

Retirez la streptavidine non liée et lavez-la avec un tampon. Ajoutez des protéines et un détergent non ionique pour bloquer les sites non spécifiques et perméabiliser les cellules.

Retirez cette solution et incubez avec des anticorps primaires ciblant des protéines cellulaires spécifiques.

Retirez les anticorps non liés.

Incuber avec des anticorps secondaires marqués au fluorophore et un colorant fluorescent pour lier les anticorps primaires liés aux protéines et marquer les noyaux.

Retirez les molécules non liées. Laver avec un t