Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:53 min • July 8th, 2025
Commencez avec une lamelle contenant des neurones en culture exprimant des protéines de membrane de vésicule synaptique, y compris la synaptophysine et la synaptotagmine-1 marquées par fluorescence.
Retirez le milieu, ajoutez un mélange de tampon de dépolarisation et d’anticorps primaires, puis incuberez.
Les ions tampons pénètrent dans les cellules, stimulant la fusion des vésicules synaptiques avec la membrane, ce qui expose la synaptotagmine-1.
Les anticorps primaires se lient sélectivement à la synaptotagmine-1 exposée.
Jetez le tampon et lavez-le avec le milieu pour éliminer les anticorps non liés.
Introduire un milieu frais et incuber pour faciliter l’internalisation de la membrane, en formant des vésicules recyclées avec de la synaptophysine marquée et de la synaptotagmine-1 liée aux anticorps.
Retirez le fluide, fixez les cellules et lavez.
Introduire un tampon bloquant à base de détergent avec des anticorps secondaires couplés à des fluorophores.
Le détergent perméabilise les cellules, permettant aux anticorps secondaires d’interagir avec la synaptotagmine-1 liée aux anticorps.
Soulevez la lamelle, lavez-la à l’eau et séchez-la.
Placez la lamelle face vers le bas sur une l
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