Établissement d'un modèle de maladie d'Alzheimer dans le cerveau d'un poisson-zèbre par injection de peptide amyloïde

Remplissez un capillaire d’injection de verre avec une solution de peptides amyloïdes monomères synthétiques, qui sont des peptides anormaux ayant des propriétés sujettes à l’agrégation.

Insérez le capillaire dans un support de micro-injection.

Placez simultanément un poisson-zèbre dans une boîte de Pétri contenant une solution anesthésique.

Une fois le poisson anesthésié, tenez-le latéralement avec une pince pour fixer la tête.

Faites une petite incision dans le crâne du poisson à la jonction des deux plaques latérales pour accéder au cerveau antérieur riche en neurones.

Maintenant, insérez l’aiguille capillaire dans l’incision et injectez la solution de peptide amyloïde dans le cerveau antérieur.

Transférez le poisson-zèbre dans un récipient de récupération avec de l’eau en circulation.

À l’intérieur du cerveau antérieur, les peptides amyloïdes s’accumulent près des neurones.

Ces peptides se replient spontanément pour former des feuillets bêta et s’agrègent autour des neurones pour former des plaques amyloïdes toxiques.

Ces plaques endommagent les neurones et altèrent la transmission de leurs signaux.

Cela établit un modèle de poisson-zèbre de la maladie d’Alzheimer, un trouble cérébral caractérisé par des plaques amyloïdes.

Utilisez un extracteur d’aiguille avec les paramètres décrits dans le protocole de texte, pour préparer des capillaires d’injection de verre. Ajustez le réglage de la pression sur la source de pression à 25 PSI. Ensuite, sur le micro-injecteur, réglez la pression de maintien sur 20 PSI, la pression d’éjection sur 10 PSI, la valeur de période sur 2,5 et la valeur de déclenchement sur 100 millisecondes. Ensuite, chargez le capillaire en verre avec la solution d’injection.

Ensuite, insérez le capillaire en verre dans le support de micro-injection et ajustez l’angle d’injection à 45 degrés. Placez un poisson dans une nouvelle boîte de Pétri remplie de solution d’anesthésification. Une fois anesthésié, tenez le poisson avec une pince et orientez-le pour l’injection. À l’aide de la pointe d’une aiguille de calibre 30, générez une fente dans le crâne au-dessus du tectum optique où les deux plaques latérales se rencontrent. N’utilisez que la pointe de l’aiguille et ne pénétrez pas plus de 1 millimètre à travers le crâne.

Ensuite, tout en continuant à tenir le poisson, insérez la pointe du capillaire en verre à travers le site d’incision. Orientez l’extrémité du capillaire en verre vers le télencéphale à un angle de 45 degrés, puis injectez 1 microlitre de solution. Remettez le poisson dans un récipient de transport jusqu’à ce qu’il se rétablisse. Ensuite, connectez-vous au récipient à l’eau des poissons qui circule régulièrement pour assurer une qualité d’eau optimale.