Établissement d’un modèle murin de lésion cérébrale hypoxique-ismémique néonatale

Fixez l’abdomen d’un bébé souris anesthésié sous un microscope de dissection.

Faites une incision dans le cou.

Rétractez le tissu adipeux pour exposer l’artère carotide droite unilatérale.

Lister l’artère pour restreindre le flux sanguin vers l’hémisphère cérébral droit, simulant une condition ischémique.

Fermez l’incision et transférez le chiot dans une chambre hypoxique.

Une fois que le chiot a repris conscience, fermez la chambre et abaissez les niveaux d’oxygène pour établir un état hypoxique.

La diminution de l’apport sanguin et des niveaux d’oxygène dans le cerveau entraîne la libération de neurotransmetteurs excitateurs.

Ces neurotransmetteurs induisent une hyperexcitabilité neuronale, un afflux de calcium et des dommages dépendants du calcium aux membranes neuronales, aux protéines cellulaires et à l’ADN, entraînant la mort neuronale.

En réponse, les microglies s’activent et libèrent des cytokines pro-inflammatoires, aggravant les lésions cérébrales.

Laissez le chiot récupérer et grandir pendant une semaine.

Anesthésiez le chiot, positionnez-le vers le bas de l’abdomen et faites une incision du cuir chevelu.

Visualisez la lésion cérébrale dans l’hémisphère droit à travers le crâne semi-transparent pour détecter la lésion hypoxique-ischémique.

Après avoir anesthésié au moins cinq bébés souris P7, placez un petit sous un microscope de dissection avec l’abdomen vers le haut, puis nettoyez le cou avec de l’alcool. Pour commencer la chirurgie, utilisez des ciseaux pour faire une incision de 0,7 millimètre dans le cou. Ensuite, retirez soigneusement le tissu adipeux à l’aide d’une pince jusqu’à ce que l’artère carotide droite unilatérale soit exposée. Ensuite, à l’aide d’une suture 5-0, ligaturez l’artère carotide droite unilatérale.

Maintenant, suturez l’incision dans le cou avec du nylon 5-0 et stérilisez l’incision. Ensuite, laissez le chiot récupérer dans une chambre hypoxique à 37 degrés Celsius avec le couvercle ouvert pendant environ une heure. Placez une autre souris manipulée chirurgicalement dans la chambre hypoxique pour récupérer. Une fois que les chiots sont tous complètement réveillés, fermez le couvercle de la chambre et diminuez les niveaux de gaz pour établir des conditions hypoxiques.

Après 90 minutes d’hypoxie, retournez les chiots cérébrolésés dans leurs cages. Une semaine plus tard, préparez les chiots pour la chirurgie comme avant afin de rechercher des preuves de la blessure. Faites une incision dans le cuir chevelu pour identifier la lésion cérébrale dans la zone postérolatérale de l’hémisphère droit. Regardez à travers le crâne semi-transparent pour trouver des preuves d’une lésion corticale et d’une lésion de l’hippocampe, catégorisez ainsi les chiots comme des témoins blessés ou non blessés. Après vérification, fermez le cuir chevelu avec une suture et stérilisez l’incision.