Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:05 min • July 8th, 2025
Commencez par une souris anesthésiée avec le crâne exposé. La souris est fixée dans un cadre stéréotaxique contenant une seringue pré-remplie de protéines bêta-amyloïdes sujettes à l’agrégation.
Marquez le bregma, un point de référence clé pour déterminer les coordonnées d’infusion de protéines.
Déplacez la seringue et touchez le bregma, puis le lambda, pour déterminer les coordonnées dorsale-ventrale, assurant ainsi une profondeur d’aiguille précise.
Repositionnez la seringue au-dessus de la coordonnée médiale-latérale prédéterminée, en ciblant le gyrus denté, crucial pour le traitement de la mémoire.
Touchez la surface du crâne, en vous assurant que la coordonnée dorsale-ventrale est dans la limite, et marquez-la. Répétez cette procédure du côté opposé.
Percez à la coordonnée médiale-latérale marquée, injectez les protéines bêta-amyloïdes dans le gyrus denté et maintenez-les pour éviter le reflux.
Percez et injectez des protéines bêta-amyloïdes du côté opposé pour une dispersion uniforme des protéines.
Détachez les barres d’oreille de la souris, puis suturez l’incision.
Au fil du temps, les protéines bêta-amyloïdes s’agrègent pour former des plaques qui dégradent les neurones du gyrus denté et perturbent le traitement de la mémoire, entraînant la maladie d’Alzheimer.
Faites une incision de 2 à 3 millimètres dans la ligne médiane du cuir chevelu avec un scalpel. Utilisez des ciseaux fins droits pour étendre la ligne d’incision à environ 1,0 centimètre afin d’exposer la suture sagittale, le bregma et le lambda du crâne. Après cela, utilisez des pinces pour séparer la peau.
Nettoyez le crâne avec un coton-tige stérile imbibé de solution saline stérile. Utilisez ensuite un coton-tige propre et sec pour sécher le crâne. Ensuite, marquez un point sur le bregma. Positionnez la seringue Hamilton à l’aide du micromanipulateur de manière à ce que la pointe de l’aiguille touche juste le point sur le bregma. Ensuite, enregistrez les coordonnées DV.
Marquez un point sur le point lambda. Assurez-vous que l’axe AP du crâne est de niveau en déplaçant la seringue vers l’arrière jusqu’au point lambda. La pointe de l’aiguille doit toucher le point lambda comme elle l’a fait pour le point bregma. Après cela, enregistrez la position DV. Les coordonnées DV pour bregma et lambda doivent être comprises entre 0,5 millimètre.
Maintenant, remettez la pointe de l’aiguille sur le point bregma. Enregistrez la position AP de départ. Ensuite, calculez la position finale du point d’accès en soustrayant 2 millimètres de la coordonnée de départ du point de frappe, puis repositionnez l’aiguille de la seringue à la dernière coordonnée de point d’accès.
Ensuite, enregistrez les coordonnées ML actuelles. Calculez les coordonnées ML finales gauche et droite en ajoutant ou en soustrayant 1,3 millimètre à la coordonnée ML de départ, puis déplacez l’aiguille de la seringue jusqu’aux coordonnées ML finales. Touchez la pointe de l’aiguille à la surface du crâne sur les deux coordonnées ML finales et assurez-vous que les coordonnées DV sont à moins de 0,5 millimètre.
Pendant qu’à la fin de la coordonnée ML, tirez l’aiguille de 0,5 à 1 centimètre au-dessus du crâne. Marquez un point sur le crâne avec un marqueur à pointe extra-fine de couleur foncée. Répétez cette étape pour le côté controlatéral du crâne. Ensuite, éloignez la seringue.
Percez un trou sur la coordonnée ML gauche ou droite sur le crâne à l’aide d’un foret de 0,8 millimètre. Répétez cette étape pour le côté controlatéral. Ensuite, déplacez la seringue dans l’un des trous nouvellement introduits. Abaissez l’aiguille juste au-delà du crâne et veillez à ne pas percer le cerveau.
Pour vous assurer que l’aiguille a passé le crâne, poussez doucement l’aiguille contre le crâne pour vous assurer que l’aiguille ne sort pas du trou. Ensuite, enregistrez les coordonnées DV de départ. Calculez la coordonnée DV finale en soustrayant 2,2 millimètres à la coordonnée DV de départ, puis abaissez l’aiguille à la coordonnée DV finale.
Ensuite, réglez la pompe d’injection stéréotaxique pour infuser 4 microlitres de Aβ1-42 dans le gyrus denté à un taux de 0,5 microlitre par minute. Après la perfusion, laissez l’aiguille en place pendant une minute supplémentaire pour minimiser le reflux de la solution hors du site d’injection. Après cela, déplacez l’aiguille de l’autre côté du cerveau et répétez la procédure.
Maintenant, dévissez les barres d’oreille. Utilisez une pince à motif standard pour fermer le cuir chevelu et sceller la plaie avec une suture. Retirez le protège-nez et retirez la souris.