Coloration immunofluorescente de populations neuronales dans le tractus gastro-intestinal embryonnaire murin

Prenez le tractus gastro-intestinal d’une souris embryonnaire transgénique fixe au stade de développement souhaité.

Le système nerveux entérique du tractus gastro-intestinal comprend des neurones entériques et des neurones cholinergiques exprimant la choline acétyltransférase.

Ces neurones cholinergiques expriment également une protéine fluorescente entraînée par le promoteur de la choline acétyltransférase.

Incuber le tractus avec un détergent non ionique et des protéines pour perméabiliser les cellules et empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.

Remplacer par des anticorps primaires. Incuber pour que les anticorps se lient à leurs protéines cibles dans les neurones, respectivement.

Retirez les anticorps non liés et lavez-les avec un tampon.

Incuber avec des anticorps secondaires conjugués aux fluorophores pour se lier spécifiquement aux anticorps primaires liés aux protéines cibles.

Retirez l’excès d’anticorps et lavez-les avec un tampon.

Immergez le tractus marqué dans un milieu de montage contenant un colorant nucléaire pour colorer les noyaux. Maintenant, montez une lamelle.

À l’aide de la microscopie confocale, visualisez et analysez la distribution des neurones choli