Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:12 min • July 8th, 2025
Placez une souris transgénique en position dorsale. La souris exprime une forme mutée de la protéine alpha-synucléine, qui est sujette à l’agrégation.
Prenez une suspension de fibrilles d’alpha-synucléine, agrégats de protéine alpha-synucléine mal repliée.
Injecter les fibrilles dans la cavité péritonéale pour permettre leur distribution systémique.
Une fois dans la circulation sanguine, les fibrilles atteignent le système nerveux central et se lient aux cellules endothéliales de la barrière hémato-encéphalique.
Les fibrilles sont transportées par des vésicules à travers les cellules et pénètrent dans le tissu nerveux. Ils envahissent ensuite les neurones par endocytose et favorisent l’agrégation des protéines alpha-synucléines mutées.
Ces agrégats sont libérés par exocytose et se propagent aux neurones voisins, à la microglie et aux astrocytes.
La reconnaissance des agrégats déclenche la libération par la microglie d’espèces réactives de l’oxygène, qui endommagent les tissus, et de cytokines, qui recrutent des cellules immunitaires supplémentaires. Il en résulte une neuroinflammation qui conduit à la mort des cellules neurales.
Permettez à la souris de récupérer pour évaluer la neuroinflammation médiée par l’alpha-synucléine.
Pour les injections intrapéritonéales, narcotiser brièvement les animaux dans une chambre d’anesthésie avec de l’isoflurane. Encore une fois, pincez l’orteil de l’animal et confirmez qu’il ne retire pas son membre postérieur pour assurer une bonne anesthésie. Remplissez une seringue hypodermique jetable de calibre 27 avec 50 microlitres de fibrilles d’alpha-synucléine soniquée ou PBS.
Tenez l’animal en position dorsale, la tête tournée vers l’enquêteur, et vers le bas à environ 45 degrés. Injecter directement dans le péritoine de la souris sans pénétrer dans l’intestin grêle ou le caïcum situé derrière la paroi abdominale. Surveiller les animaux jusqu’à ce qu’ils se soient remis de l’anesthésie.